欢迎来到微传网! | 帮助中心 分享文档,创造价值!
微传网
全部分类
  • 办公文档 >
    办公文档
    往来文书 招标投标 传真信函 解决方案 事务文书 活动策划 股份制文书 调研文书 规章制度 统计图表 PPT模板素材 工作计划 工作总结 会议纪要 产品手册 课程设计 求职简历 通知/申请 演讲致辞 说明文书 词典 简明教程 办公软件应用 教育范文
  • 中学教育 >
    中学教育
    中学课件 中考 高考 中学作文 职业教育 试题 教学研究 竞赛题 高考英语 初中教育 高中教育 体育理论与教学 中学实验 音乐美术
  • 幼儿/小学教育 >
    幼儿/小学教育
    幼儿教育 小学课件 学习方法 课外知识 爱心教育 教育管理 小学教育
  • 高等教育 >
    高等教育
    研究生课件 大学课件 理学 工学 哲学 历史学 教育学 农学 思想政治 专业基础教材 生物学 语言学 微积分 统计学 实验设计 科普读物
  • 论文 >
    论文
    期刊/会议论文 开题报告 经济论文 管理论文 社科论文 文学论文 医学论文 哲学论文 艺术论文 法律论文 自然科学论文 通讯论文 论文指导/设计 毕业论文 大学论文
  • 管理/人力资源 >
    管理/人力资源
    经营企划 销售管理 代理连锁 工程管理 信息管理 资本运营 企业信息化 市场营销 广告经营 项目管理 营销创新 招聘面试 人事档案 员工关系 企业文化 宣传企划 企业文档 公司方案 商业合同 财务报表 励志书籍工具 咨询培训 劳动就业 商务礼仪 地方省市劳动合同 管理学资料 创业
  • 经济/贸易/财会 >
    经济/贸易/财会
    经济学 财政/国家财政 商品学 市场分析 进出口许可 贸易 网络营销/经济 税收 稽查与征管/审计 资产评估/会计
  • IT计算机 >
    IT计算机
    计算机原理 PHP资料 linux/Unix相关 C/C++资料 Java .NET windows相关 开发文档 管理信息系统 软件工程 网络信息安全 网络与通信 图形图像 行业软件 人工智能 计算机辅助设计 多媒体 软件测试 计算机硬件与维护 网站策划/UE 网页设计/UI 网吧管理 电子支付 搜索引擎优化 服务器 电子商务 Visual Basic 数据挖掘与模式识别 数据库 Web服务 网络资源 Delphi/Perl Python CSS/Script Flash/Flex 手机开发 UML理论/建模 并行计算/云计算 嵌入式开发 计算机应用/办公自 数据结构与算法 SEO
  • 资格/认证考试 >
    资格/认证考试
    全国翻译资格认证 自考 成考 专升本考试 公务员考试 思科认证 微软认证 司法考试 教师资格考试 物流师考试 计算机等级考试 注册税务师 人力资源管理师 会计职称考试 出国培训 质量管理体系认证 医师/药师资格考试
  • 行业资料 >
    行业资料
    社会学 纺织服装 食品饮料 家电行业 造纸印刷 酒店餐饮 物流与供应链 交通运输 旅游娱乐 文化创意 航空/航天 船工业技术 矿业工程 石油、天然气 工业冶金工业 金属学与金属工艺 武器工业 能源与动力工程 原子能技术 化学工业 轻工业/手工业 水利工程 农业工程 农作物 园艺 林业 畜牧 水产/渔业 展会 生活用品 航海/船舶 家居行业 实验 工业设计 室内设计 系统集成 国内外标准规范 新闻/广播 公共安全/安全评价
  • 金融/证券 >
    金融/证券
    股票中长线技巧 股票短线技巧 股票经典资料 股票技术指标学习 金融资料 财经资料 投融资/租赁
  • 研究报告 >
    研究报告
    信息产业 金融 教育 农林牧渔 冶金 石油化工 煤炭 交通 新能源 轻工 产业政策 商业贸易 国防军事 技术指导 安防行业 制药行业 统计年鉴/数据分析
  • 换一换
    首页 微传网 > 资源分类 > DOC文档下载
     

    3种艰难梭菌感染检测方法的比较.doc

    • 资源ID:1489       资源大小:137.00KB        全文页数:10页
    • 资源格式: DOC        下载权限:游客/注册会员/VIP会员    下载费用:10金币 【人民币10元】
    快捷注册下载 游客一键下载
    会员登录下载
    三方登录下载: 微信登录 微信开放平台登录 QQ登录  
    下载资源需要10金币 【人民币10元】   |   1元文档测试下载
    邮箱/手机:
    温馨提示:
    支付成功后,系统会自动生成账号(用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号),方便下次登录下载和查询订单;
    支付方式: 支付宝    微信支付   
    验证码:   换一换

    加入VIP,免费下载
     
    友情提示
    2、PDF文件下载后,可能会被浏览器默认打开,此种情况可以点击浏览器菜单,保存网页到桌面,既可以正常下载了。
    3、本站不支持迅雷下载,请使用电脑自带的IE浏览器,或者360浏览器、谷歌浏览器下载即可。
    4、本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩,下载后原文更清晰   

    3种艰难梭菌感染检测方法的比较.doc

    3 种艰难梭菌感染检测方法的比较 王丽志 陈丽丹 肖斌 甘燕玲 李林海 王前 南方医科大学南方医院检验科 中国人民解放军广州 总医院检验科 摘 要 目的 评价3种艰难梭菌感染 CDI 检测方法的诊断效能, 为CDI寻找合适的诊 断方案。方法 收集中国人民解放军广州总医院 2016年5月 1 2月疑似 CDI的腹 泻患者粪便标本70 例, 采用3 种方法进行检测 1 培养法; 2 酶联荧光法 检测艰难梭菌毒素 A/B CDAB 和谷氨酸脱氢酶 GDH ; 3 q-PCR 扩增艰难梭 菌特异性基因tpi和毒素基因 tcd A/tcd B 。以培养法的检测结果作为参考 标准, 计算 3种方法的诊断指标。结果 收集粪便样本 70例, 分离艰难梭菌 13 例 18.57 , 其中产毒株6例 8.57 。 q-PCR法鉴定tpi基因阳性17例, 其 敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率分别为 92.31、91.23、 70.59、98.11、91.43, 均高于GDH法 84.62、84.21、55.00、96.00、 84.29 χ 2 24.881, P0.1 为阳性。二者均按试剂说明书要求做定标和质控。 1.6 q-PCR 法检测粪便艰难梭菌和毒素基因 取180220 mg 粪便标本, 参照粪便基因组 DNA提取试剂盒说明书操作步骤, 提 取基因组DNA g DNA 作为模板。采用Taq Man 探针法定性三重q PCR 检测tpi、 tcd A和tcd B的存在。10μL反应体系如下2Master Mix 5.0μL, 上下游引 物 10μmol 各0.3μL, 模板 1 ng/μL 1.0μL, 去离子水3.4μL。反应条 件95℃预变性5 min, 95℃变性15 s, 60℃退火30 s, 72℃延伸15 s, 40 个 循环后95℃15 s, 60℃1 min, 95℃15 s。结果判定标准 1 tpi 和tcd B的 Ct≤40, 为产毒型艰难梭菌阳性; 2 tpi≤38, tcd B 无扩增, 为不产毒型艰 难梭菌阳性; 3 tpi 的3836 或No Ct, 为结果无效。所用引物见表 2。 表2 粪便q-PCR艰难梭菌tpi、 毒素基因 tcd A/tcd B 所用引物Tab.2 Primers for q-PCR of CD tpi and toxin gene tcd A/tcd B in stool specimens 下 载原表 1.7 统计学分析 实验数据用SPSS 20.0 进行数据分析, 3种检测方法的阳性率比较采用配对卡方 检验, 以 P0.05认为差异有统计学意义, 并计算灵敏度、特异度、阳性预测值 和阴性预测值。 2 结果 2.1 3 种检测方法与参考标准检测结果 本实验共收集疑似艰难梭菌感染腹泻粪便标本 70例, 经过培养法分离获得 13 株艰难梭菌, 其中 6例携带毒素基因, 阴性标本 57例 表3 ;CDAB 检测结果6 例为阳性, 3例灰区, 61例为阴性 表4 ;70 例标本中20例GDH为阳性, 50 例阴性 表3 。根据荧光定量 PCR检测结果, tpi基因阳性标本共计 17例 表 3 , 其中毒素基因 tcd A/tcd B双阳性7例 表4 。 表3 GDH及q-PCR检测 tpi与培养法结果的比较 Tab.3 Comparison of GDH and q-PCR detection for tpi with culture 下载原表 2.2 联合检测与参考标准检测结果 q-PCR tpi 联合CDAB与GDH联合CDAB分别将产毒株培养作为检测标准进行比 较, 至少一种方法检测为阳性认为结果判断为阳性 表5 。 表4 CDAB, q-PCR检测 tcd A/tcd B与产毒株培养结果的比较 Tab.4 Comparison of CDAB and q-PCR detection for tcd A/tcd B with culture of toxin-producing strains 下载原表 表5 q-PCR与GDH联合 CDAB检测结果与产毒株培养比较 Tab.5 Comparison of q-PCR and detection of both GDH and CDAB with culture of the toxin-producing strains 下载原表 2.3 各个实验室方法单独及联合检测的诊断学指标 以表35 的数据计算各检测方法的灵敏度, 特异度, 阳性预测值, 阴性预测值 及诊断符合率, 各诊断指标最优并有统计学意义的加粗下划线标注 表6、7 。 表6 各实验室方法单独及联合检测的诊断学指标Tab.6 Diagnostic efficacy of the laboratory s alone and in combination 下载原表 表7 q-PCR与GDH和 CDAB检测数据及统计学分析 Tab.7 Statistical analysis of the results q-PCR, GDH and CDAB detection 下载原表 2.4 粪便培养产毒艰难梭菌 2.4.1 粪便培养 艰难梭菌在哥伦比亚血平板上面呈灰白色, 边缘不规则菌落, 随着暴露于空气 中的时间增加, 菌落颜色变得更灰, 边缘深染 图1A 。在显色平板上, 艰难 梭菌为黑色有光泽菌落, 边缘不整齐 图1B 。 2.4.2 产毒株鉴定 艰难梭菌特异性基因 tpi能辅助质谱确证分离的菌株为艰难梭菌, tcd A/B 是艰 难梭菌的毒素编码基因, 提取13株MALDI-TOF MS鉴定为艰难梭菌的 DNA, PCR 扩增tpi 和tcd A/tcd B 图2 。13株均含有 tpi基因, 确为艰难梭菌, 6株 产毒株中有5株为 AB型菌株, 1株为AB型, 其余均为不产毒菌株。 3 讨论 艰难梭菌感染 CDI 被认为是引起抗生素相关性腹泻的主要原因。尽管各级卫 生防疫部门实行了一系列预防感染和降低细菌传播的措施, 但艰难梭菌的感染 率仍居高不下[11-13]。目前CDI的准确诊断是临床预防和治疗所面对的问题之 一。 图1 艰难梭菌在血平板上及显色平板上的菌落形态Fig.1 Colony morphology of CD on blood plate A and chromogenic plate B . 下载原图 图2 艰难梭菌tpi及毒素基因 tcd A/tcd B 扩增电泳图Fig.2 Amplification and electrophoresis of CD tpi and toxin gene tcd A/tcd B .MDL2000 DNA Marker NNegative control, H2O;PPositive control, Clostridium difficile strain ATCC-BAA-2155. 下载原图 为此, 本研究同时采用哥伦比亚血琼脂平板和艰难梭菌显色平板进行艰难梭菌 的分离培养, 对两种平板上的疑似菌落均采用 MALDI-TOF MS进行准确鉴定作为 判断其他方法的参考标准。在本研究收集的 70例粪便标本中, 我们以培养法鉴 定艰难梭菌13株, 包括6株产毒株和7株非产毒株, 分离率达到18.57。参考 国内同类研究, 2008 年上海华山医院[14]从 587份住院病人的粪便标本中检出 56份艰难梭菌阳性的标本, 分离率为9.4;2009 年北京的程颖等[14]从112份 腹泻标本中检测出 12株艰难梭菌, 阳性率为 10.7;2013年广州医学院[16]从 467例腹泻患者粪便标本中分离到艰难梭菌 29例, 阳性检出率6.2;本课题组 2014年至 2015年在本院收集成人腹泻标本 675份, 培养出艰难梭菌 57株, 分 离率为8.44[17]。以上研究仅使用了常规血平板培养法, 而本研究在联合血平 板及显色平板后, 以及 MALDI-TOF MS的使用, 使菌株分离率显著提高。 目前艰难梭菌感染检测最常见的方法是酶联荧光分析检测细菌毒素 CDAB。本研 究中粪便样本的CDAB 检出率为 8.57 6/70 , 与国内同类研究的毒素检出率 8.70 8/92 [18]较为一致, 显著低于国外报道的 15.86 88/555 [19]。另 3例灰区标本需结合临床判断是否为艰难梭菌感染。6例阳性标本中有 1例经培 养未得到艰难梭菌, 但分离出气荚膜梭菌。据文献报道, 产气荚膜梭菌毒素 Tpe L的氨基酸序列与艰难梭菌毒素 A Tcd A 和B Tcd B 具有3039的同源性, 且艰难梭菌和产气荚膜梭菌在肠道疾病中可能具有协同作用[20], 因此我们将 该粪便标本采用哥伦比亚血平板和艰难梭菌显色平板再次培养, 依然仅获得产 气荚膜梭菌。将获得的产气荚膜梭菌菌株培养 48 h后检测细菌CDAB, 测试值为 0.27, 判断为灰区。因此我们认为产气荚膜梭菌可能造成 CDAB检测的假阳性结 果。 另外由于样本的保存与运送条件不当等容易造成蛋白降解或抗原变异, 也可 能造成检出率的偏差。 与此同时, 谷氨酸脱氢酶是艰难梭菌表面大量存在的保守抗原, 其稳定性和灵 敏度较高, 最大优势在于有很高的阴性预测值, 通过Meta分析发现, GDH检测 的阴性预测值在94.6100[20]。本实验中 GDH检测灵敏度和特异度分别为 84.62和 84.21, 阴性预测值 96.00, 与现有研究较为一致[23-24]。 最后, 本实验采用q-PCR方法同步扩增艰难梭菌特异性基因tpi、 毒素基因tcd A 和tcd B, 其中tpi 阳性标本17例, 毒素基因阳性 7例, 产毒型艰难梭菌阳性 率为10。本实验中扩增特异性基因 tpi和毒素基因 tcd A/tcd B与标准方法比 较一致性分别达到91.43和92.86, tpi检测的阴性预测值 98.11 高于GDH 96.00 检测, 扩增毒素基因 tcd A/tcd B 的诊断价值显著优于CDAB。上海交 通大学医学院附属瑞金医院 2014年报道采用 Xpert Clostridium difficile 检 测试剂盒检测艰难梭菌毒素基因 tcd B, 与培养法相比较敏感性、特异性、阳性 预测值和阴性预测值分别为 87.2、92.2、81.0和94.9, 与该研究相比, 二 者在特异度上差异并不大, q-PCR的高特异性得以论证。我们同时扩增毒素基因 tcd A和 tcd B, 可以用于筛查临床少见但不能忽略的 AB型菌株[1]。艰难梭菌 特异性基因tpi也有助于筛选携带非产毒艰难梭菌的标本, 进行分离培养后可 用于后续的科学研究。Etienne-Mesmin等[25]在研究小鼠艰难梭菌定殖与发病 时发现q-PCR检测到的粪便中毒素基因水平与细胞毒性实验检测到的粪便毒素 水平是相关的。综合二者, 开展q-PCR方法检测艰难梭菌特异性基因 tpi、毒素 基因可满足临床快速准确诊断的需要。在本研究中, q-PCR方法仍然具有一定的 假阳性出现, 我们将进一步加大样本量进行验证, 以及寻求特异性更高的引物 序列方案。 我们还通过回顾性查阅病例发现所有艰难梭菌培养阳性患者住院期间均长期使 用质子泵抑制剂联合亚胺培南和替加环素等抗生素。 大量研究也证实 CDI发病与 患者年龄 ≥65岁 、住院时间、炎性反应肠病、使用免疫抑制剂、质子泵抑 制剂及广谱抗生素等多种危险因素密切相关[26-27]。因此对具备以上诱发 CDI 因素的患者应加强对 CDI的监测。 对于疑似 CDI患者, 可利用qPCR法进行初筛。 在满足临床快速诊断的前提下, 可结合艰难梭菌显色平板的菌培养进行确诊。 总之, 与其他检测方法相比, q-PCR检测粪便标本中的艰难梭菌具有时效性强、 灵敏度高、特异性好等优点, 适用于临床推广。 参考文献 [1]Chen LD, Li LH, Liao Y, et al.Molecular characterization and antimicrobial susceptibility of tcd A-negative Clostridium difficile isolates from Guangzhou, China[J].Diagn Microbiol Infect Dis, 2016, 84 4 361-5. [2]Telekes A.Oncologic aspects of Clostridium difficile[J].Orv Hetil, 2016, 157 28 1110-6. [3]Martin JS, Monaghan TM, Wilcox MH.Clostridium difficile infectionepidemiology, diagnosis and understanding transmission[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2016, 13 4 206-16. [4]Cohen SH, Gerding DN, Johnson S.Clinical practice guidelines for clostridium difficile infection in adults2010 update by the society for healthcare epidemiology of America SHEA and the infectious diseases society of America IDSA [J].Infect Control Hosp Epidemiol, 2010, 31 5 431-55. [5]章黎华, 李贞, 江岑, 等.3 种检测艰难梭菌方法的临床应用评估[J].微生 物与感染, 2016, 11 1 24-7. [6]Chen SY, Gu HW, Sun CL, et al.Rapid detection of Clostridium difficile toxins and laboratory diagnosis of Clostridium difficile infections[J].Infection, 2017, 45 3 255-62. [7]郭晓月, 黄磊.艰难梭菌感染实验室诊断的研究进展[J].检验医学与临床, 2013, 20 10 2763-5. [8]关宏, 钱家鸣, 陆星华, 等.用PCR方法检测粪便难辨梭状芽胞杆菌[J].临 床消化病杂志, 2001, 13 04 147-8. [9]祖冬梅.耐多药结核分枝杆菌多重 Q-PCR 快速检测方法的建立[D].广州华南 理工大学, 2013. [10]王宇, 靳伟东, 兰凯, 等.荧光定量 PCR 技术在临床微生物检测中的应用 [J].中国卫生标准管理, 2015, 30 6 151-2. [11]Rodriquez C, Van Broeck J, Taminiau B, et al.Clostridium difficile infectionEarly history, diagnosis and molecular strain typing s[J].Microb Pathog, 2016, 9759-78. [12]Nicholas A, Kim YK, Lee WK, et al.Molecular epidemiology and antimicrobial susceptibility of Clostridium difficile isolates from two Korean hospitals[J].PLo S One, 2017, 12 3 e174716. [13]Shea KM, Hobbs ALV, Jaso TC, et al.Effect of a healthcare-system respiratory fluoroquinolone restriction program to alter utilization and impact rates of Clostridium difficile infection[J].Antimicrob Agents Chemother, 2017, 61 6 e00125-17. [14]Huang H, Wu S, Wang M, et al.Molecular and clinical characteristics of Clostridium difficile infection in a University Hospital in Shanghai, China[J].Clin Infect Dis, 2008, 47 12 1606-8. [15]程颖, 卢金星, 鄢盛恺, 等.临床分离艰难梭菌毒素携带特征研究[J].疾病 监测, 2009, 24 03 193-5. [16]唐海先.腹泻患者艰难梭菌检测及分析[D].广州医科大学, 2014. [17]陈丽丹.不同来源的艰难梭菌其毒素, MLST 分型及药敏情况的分析[D].广州 南方医科大学, 2016. [18]李艳明, 王伟琦, 简子娟, 等.住院腹泻患者艰难梭菌的检测和分析[C].中 华医学会第十二次全国临床微生物学术年会暨第十一次全球华人临床微生物学 与感染症学术年会, 甘肃兰州, 2015. [19]Shin BM, Lee EJ, Kuak EY, et al.Comparison of VIDAS CDAB and CDA immunoassay for the detection of Clostridium difficile in a tcd A - tcd B C.difficile prent area[J].Anaerobe, 2009, 15 6, SI 266-9. [20]Amimoto K, Noro T, Oishi E, et al.A novel toxin homologous to large clostridial cytotoxins found in culture supernatant of Clostridium perfringens type C[J].Microbiology, 2007, 153 Pt 4 1198-206. [21]Diniz AN, Silva ROS, Oliveria Junior CA, et al.Clostridium perfringens type A net F and net E positive and Clostridium difficile co-infection in two adult dogs[J].Anaerobe, 2016, 3894-6. [22]Uzal FA, Diab SS, Blanchard P, et al.Clostridium perfringens type C and Clostridium difficile co-infection in foals[J].Vet Microbiol, 2012, 156 3/4 395-402. [23]Shetty N, Wren M, Coen PG.The role of glutamate dehydrogenase for the detection of Clostridium difficile in faecal samplesa metaanalysis[J].J Hosp Infect, 2011, 77 1 1-6. [24]Crobach M, Dekkers OM, Wilcox MH, et al.European society of clinical microbiology and infectious diseases ESCMID data review and recommendations for diagnosing clostridium difficileinfection CDI [J].Clin Microbiol Infect, 2009, 15 12 1053-66. [25]Etienne-Mesmin L, Chassaing B, Adekunle OA, et al.Toxinpositive Clostridium difficile latently infect mouse colonies and protect against highly pathogenic C.difficile[J].Gut, 2017, pii313510. [26]Lo Vecchio A, Zacur GM.Clostridium difficile infectionan update on epidemiology, risk factors, and therapeutic options[J].Curr Opin Gastroenterol, 2012, 28 1 1-9. [27]朱苗苗, 李慧兰, 罗佳, 等.质子泵抑制剂的使用与艰难梭菌感染风险相关 性的Meta 分析[J].中国循证医学杂志, 2016, 16 03 278-85.

    注意事项

    本文(3种艰难梭菌感染检测方法的比较.doc)为本站会员(admin)主动上传,微传网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知微传网(发送邮件至changjinlai@126.com或直接QQ联系客服),我们立即给予删除!

    温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载不扣分。




    微传网是一个办公文档、学习资料下载的在线文档分享平台!

    网站资源均来自网络,如有侵权,请联系客服删除!

     网站客服QQ:80879498  会员QQ群:727456886

    copyright@ 2018-2028 微传网络工作室版权所有

         经营许可证编号:冀ICP备18006529号-1 ,公安局备案号:13028102000124

    收起
    展开