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实验一 培养基母液的制备.ppt

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实验一 培养基母液的制备.ppt
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实验一 培养基母液的制备,本学期计划,,教学效果评价方案,,,平时成绩,实验报告,期末成绩,,,,出勤 课堂表现:听课情况、课堂操作,预习报告:10%条理性、书写规范 实验报告:10%条理性、书写规范实验结果正确性,可信性、思考题回答正确性,操作考试:20%抽签 笔试:30%,20%,30%,50%,,一、实验室设计与要求 在进行组织培养工作之前,首先应对工作中需要那些基本的设备条件有全面的了解。 实验室设计最基本应该有三个室: 准备室无菌操作室 培养室,,,,(一)、准备室 完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装及高压灭菌;器皿、材料的洗涤等工作。 1、水槽:洗涤用 2、高压灭菌锅:培养基、工具的灭菌 3、干燥箱:器皿等烘干用 4、冰箱:存放培养基母液、酶、 激素等用 5、酸度计(pH计、酸度测定计): 培养基酸度测定用,6、天平: 制作培养基用 粗天平(1/1000):称量大量元素、蔗糖、琼脂等 精密天平( 1/10000、 1/100000 ):称量微量元素、激素等 7、玻璃器皿:三角瓶、试管、培养罐、培养皿、烧杯、量筒、 移液管等 8、移液枪(根据条件需要)由枪和枪头组成 9、其他:工作台、微波炉、电炉等,,,,缓冲间(过渡室),(二)、无菌操作室 无菌操作室并非无菌,但应该保持清洁 1、超净工作台:内设紫外灯、吹风装置 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上,然后喷酒精灭菌,工作过程中注意一直开着吹风机,并且一定要关掉紫外灯,过滤网应经常清洗。 2、无菌操作用的器具:刀、镊子、剪刀、酒精灯等 3、医用小平车:推送、放置培养基用,,,,(三)、培养室 应保持干净 条件:温度,因植物不同稍有差别,一般保持在25℃左右 光照,包括每日光照时间和光照强度,一般每日13h , 2000-3000lux 1、培养架 放置培养物,每层顶部装有灯管进行照明,可用灯管数量来调节光照强度 2、空调机 调节温度 3、配电板 设置电器和开关,用以管理室内的电源 4、时控器 自动开灯、关灯,,,,鉴定室 需备有高倍显微镜、倒置显微镜、相差显微镜、解剖镜、 驯化移植室 应备有温室、弥雾装置、荫棚、移植床、钵、盆、塑料布、草炭、蛭石、粗沙等,用于试管小植株的锻炼和移植。,,二、实验目的 1、了解培养基母液的配制原理 2、学习和掌握培养基母液的配制方法。,三、实验原理,在配制培养基前,为了使用方便和用量准确,常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时,只需要按预先计算好的量吸取母液即可。 对植物外植体进行离体培养时,要依靠培养基提供生长所需的营养成分。不同材料对培养基的要求不同,适当的设计和选用培养基,对植物组织培养取得成功至关重要的。,(一)、培养基的成分及作用 在离体条件下,植物组织良好的营养要求,随植物种类而变化,培养基种类很多,但一般包括如下几部分: 1、无机营养成分 其中包括: 大量元素:氮、磷、钾、钙、硫、铁以及来源于水的氢氧元素 微量元素:硼、锰、锌、钼、铜、钴、氯等,,2、有机营养成分 为了能使组织很好的生长,在培养基里常常补加一种或一种以上维生素和氨基酸。 其中包括 维生素:硫胺素(VB1)、烟酸(VB3又称VBPP ) 、泛酸(VB5)、吡哆醇(VB6)、酸铵、钴胺素(VB12)、叶酸(VM又称VB11)、抗坏血酸(VC)等等.因培养基的种类不同,其种类和浓度不同 氨基酸:甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、 天冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基的种类不同,其种类和浓度不同。,,肌醇:又称环己六醇,在糖类的转化中起作用。根据培养基的植物不同,是否添加。 天然有机物:如椰乳、酵母提取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养,并表现出了良好的促进作用。,,3、琼脂:固化剂,使培养基凝固 4、糖(蔗糖) 糖在培养基的作用: 1)为细胞提供合成新物质的碳骨架 2)为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3)维持渗透压,,5、pH值:即酸碱度,培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境,一般将培养基调整至pH5.6—5.8。常用0.1mol/l氢氧化钠或盐酸来调节培养基的pH。但是应该注意两点; 第一、经高温高压灭菌后,培养基的pH会下降0.2-0.5,故调整后的pH应该高于目标pH 0.2-0.5个单位; 第二、 pH的大小会直接影响到琼脂的凝固能力,一般pH 大于6.0时,培养基就会变硬,低于5.0时琼脂就不能很好地凝固。,(二)、激素 自然界中,植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物,它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分化、发育。在培养基中,其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素。激素的种类、浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽
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