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自身抗体的实验室检测及临床意义.ppt

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自身抗体的实验室检测及临床意义.ppt
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自身抗体的实验室检测 及临床意义,北京友谊医院风湿科 宋淑菊,主要内容,自身抗体的概念 自身抗体的分类 自身抗体的命名 自身抗体的检测方法 常见的自身抗体,自身抗体的概念,各种原因造成的机体B细胞产生的针对自身组织成分的抗体,称为自身抗体(autoantibodies)。 自身抗体可以是生理性的,如针对衰老或死亡的自体细胞,机体产生少量的自身抗体,以便被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬,维持机体内环境的生理稳定; 自身抗体也可以是病理性的,引起自身免疫病。,自身抗体的分类,按照自身抗原在体内分布的不同可分为: 器官/组织特异性自身抗体 非器官/组织特异性自身抗体 按照检测自身抗体所用的基质不同可分为: 细胞抗体(以游离的细胞为实验基质) 细胞非特异性自身抗体,如抗核抗体 细胞特异性自身抗体,如ANCA、抗血小板抗体、抗红细胞抗体 组织抗体(以动物组织切片为实验基质),自身抗体的命名,以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写命名:如抗Sm、抗Ro、抗La抗体 以相关疾病的名字的缩写命名:如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体 以抗原的化学性质进行分类命名:如抗DNA、抗RNP抗体 以抗原的部位进行命名:如抗板层素抗体、抗核膜抗体。,自身抗体的检测方法,对流免疫电泳、免疫双扩散 免疫荧光检测法 免疫印记法 酶联免疫吸附检测法(ELISA) 放射性核素法 酶免疫斑点技术 免疫沉淀法,间接免疫荧光方法,金标法,免疫双扩散法,ANA (anti-nuclear antibodies),免疫印记法,ENA (extractable nuclear antigen),间接免疫荧光法,自身抗体,,,病人血清(一抗),玻片,,,,二抗,,,,荧光抗体,,荧光显微镜下阅片,ANA--Hep-2细胞 dsDAN抗体--短膜虫 SMA--大鼠胃组织 AMA--大鼠肾组织,,间接免疫荧光法,底物,,,,,,,,病人血清,金标记的抗体,,dsDNA抗原,,,,,,,,阴性,阳性,金标法,,抗原,,,,,,,1:4,1:16,1:32,1:64,病人血清,标准抗体,免疫双扩散,琼脂板,,,,,不同分子量的抗原,,病人血清,,酶标抗体,,显色剂,,,,判断结果,免疫印记法,间接免疫荧光法,细胞核阳性 核仁阳性 细胞浆阳性 分裂期细胞阳性,细胞核阳性,细胞核均质型(Homogeneous):抗dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体 细胞核周边型(Membranous):板层素抗体 细胞核颗粒型(Speckled): 粗颗粒:抗Sm、RNP抗体 细颗粒:抗SSA、SSB抗体,抗dsDNA抗体,荧光模式: 绿蝇短膜虫:动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。 Hep-2细胞:细胞核的均质型荧光。,,抗dsDNA抗体,自身抗原:位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。 临床意义:对系统性红斑狼疮(SLE)特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性,因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。,抗RNP/Sm抗体,荧光模式: Hep-2片:细胞核粗颗粒,核仁阴性。 肝组织切片:同上。 荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。,,抗RNP/Sm抗体,自身抗原:抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白(snRNP),由低分子量的RNA和多种蛋白质组成,RNA中尿苷(U-RNA)含量较高。 临床意义:高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔组织病(MCTD)的特征,发生率为95~100%。也可出现于SLE,但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性,发生率为20~40%。,抗SSA/SSB抗体,荧光模式 Hep-2片:细胞核呈细颗粒荧光,核仁不发光。 肝组织片:细颗粒荧光。,,抗SSA/SSB抗体,自身抗原:SSA抗原是一个小核糖核蛋白,由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。 临床意义;最常见于干燥综合征(SS),也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化(PBC),偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。,核仁阳性(Nucleolar),核仁荧光增强,核浆均质型---Scl-70抗体。 核仁均质型---PM-Scl及其他抗原抗体。 核仁细颗粒型---原纤维蛋白抗体。 核仁粗颗粒型---RNA多聚酶-1抗体。,抗Scl-70抗体,荧光模式: Hep-2片:细胞核几乎均质的荧光,核仁荧光加强而且也为均质型,胞浆无荧光。 肝组织片;细胞核颗粒或均质型荧光,常见到细胞核荧光。,,抗Scl-70抗体,自身抗原:为DNA拓扑异构酶1,分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。 临床意义:25~70%的系统性硬化症(PSS)弥漫型患者阳性,局限型硬皮病
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