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自身抗体的实验室检测及临床意义.ppt

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自身抗体的实验室检测及临床意义.ppt
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自身抗体的实验室检测 及临床意义,北京友谊医院风湿科 宋淑菊,主要内容,自身抗体的概念 自身抗体的分类 自身抗体的命名 自身抗体的检测方法 常见的自身抗体,自身抗体的概念,各种原因造成的机体B细胞产生的针对自身组织成分的抗体,称为自身抗体(autoantibodies)。 自身抗体可以是生理性的,如针对衰老或死亡的自体细胞,机体产生少量的自身抗体,以便被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬,维持机体内环境的生理稳定; 自身抗体也可以是病理性的,引起自身免疫病。,自身抗体的分类,按照自身抗原在体内分布的不同可分为: 器官/组织特异性自身抗体 非器官/组织特异性自身抗体 按照检测自身抗体所用的基质不同可分为: 细胞抗体(以游离的细胞为实验基质) 细胞非特异性自身抗体,如抗核抗体 细胞特异性自身抗体,如ANCA、抗血小板抗体、抗红细胞抗体 组织抗体(以动物组织切片为实验基质),自身抗体的命名,以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写命名:如抗Sm、抗Ro、抗La抗体 以相关疾病的名字的缩写命名:如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体 以抗原的化学性质进行分类命名:如抗DNA、抗RNP抗体 以抗原的部位进行命名:如抗板层素抗体、抗核膜抗体。,自身抗体的检测方法,对流免疫电泳、免疫双扩散 免疫荧光检测法 免疫印记法 酶联免疫吸附检测法(ELISA) 放射性核素法 酶免疫斑点技术 免疫沉淀法,间接免疫荧光方法,金标法,免疫双扩散法,ANA (anti-nuclear antibodies),免疫印记法,ENA (extractable nuclear antigen),间接免疫荧光法,自身抗体,,,病人血清(一抗),玻片,,,,二抗,,,,荧光抗体,,荧光显微镜下阅片,ANA--Hep-2细胞 dsDAN抗体--短膜虫 SMA--大鼠胃组织 AMA--大鼠肾组织,,间接免疫荧光法,底物,,,,,,,,病人血清,金标记的抗体,,dsDNA抗原,,,,,,,,阴性,阳性,金标法,,抗原,,,,,,,1:4,1:16,1:32,1:64,病人血清,标准抗体,免疫双扩散,琼脂板,,,,,不同分子量的抗原,,病人血清,,酶标抗体,,显色剂,,,,判断结果,免疫印记法,间接免疫荧光法,细胞核阳性 核仁阳性 细胞浆阳性 分裂期细胞阳性,细胞核阳性,细胞核均质型(Homogeneous):抗dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体 细胞核周边型(Membranous):板层素抗体 细胞核颗粒型(Speckled): 粗颗粒:抗Sm、RNP抗体 细颗粒:抗SSA、SSB抗体,抗dsDNA抗体,荧光模式: 绿蝇短膜虫:动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。 Hep-2细胞:细胞核的均质型荧光。,,抗dsDNA抗体,自身抗原:位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。 临床意义:对系统性红斑狼疮(SLE)特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性,因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。,抗RNP/Sm抗体,荧光模式: Hep-2片:细胞核粗颗粒,核仁阴性。 肝组织切片:同上。 荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。,,抗RNP/Sm抗体,自身抗原:抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白(snRNP),由低分子量的RNA和多种蛋白质组成,RNA中尿苷(U-RNA)含量较高。 临床意义:高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔组织病(MCTD)的特征,发生率为95~100%。也可出现于SLE,但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性,发生率为20~40%。,抗SSA/SSB抗体,荧光模式 Hep-2片:细胞核呈细颗粒荧光,核仁不发光。 肝组织片:细颗粒荧光。,,抗SSA/SSB抗体,自身抗原:SSA抗原是一个小核糖核蛋白,由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。 临床意义;最常见于干燥综合征(SS),也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化(PBC),偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。,核仁阳性(Nucleolar),核仁荧光增强,核浆均质型---Scl-70抗体。 核仁均质型---PM-Scl及其他抗原抗体。 核仁细颗粒型---原纤维蛋白抗体。 核仁粗颗粒型---RNA多聚酶-1抗体。,抗Scl-70抗体,荧光模式: Hep-2片:细胞核几乎均质的荧光,核仁荧光加强而且也为均质型,胞浆无荧光。 肝组织片;细胞核颗粒或均质型荧光,常见到细胞核荧光。,,抗Scl-70抗体,自身抗原:为DNA拓扑异构酶1,分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。 临床意义:25~70%的系统性硬化症(PSS)弥漫型患者阳性,局限型硬皮病患者阴性。,细胞浆阳性,胞浆均质型---抗核糖体抗体细颗粒---抗Jo-1抗体 胞浆颗粒型 粗颗粒---AMA抗体滴状点状---溶酶体抗体核周颗粒--高尔基体抗体 胞浆纤维型 细纤维---波形蛋白抗体环状纤维---原肌球蛋白抗体针状纤维---肌动蛋白抗体,,,抗核糖体抗体,荧光模式: Hep-2:胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光 。 肝组织片:岛状荧光。 临床意义:SLE的特异性抗体,与精神症状有关。,,抗Jo-1抗体,荧光模式: Hep-2:胞浆颗粒到细块状荧光。 肝组织片:胞浆中弱荧光。 自身抗原:组氨酰tRNA合成酶。 临床意义:见于PM,发生率25~35%。,,抗线粒体抗体,荧光模式: Hep-2:胞浆内粗的颗粒型荧光。 大鼠肾组织切片:肾小管明显荧光,肾小球荧光较弱。,,抗线粒体抗体,自身抗原:位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位,为一组自身抗原,其中与PBC有关的包括: (1)丙酮酸脱氢酶复合体(PDC) (2)支链2-氧酸脱氢酶复合体(BCOADC) (3)a-酮戊二酸脱氢酶复合体(OGDC),抗线粒体抗体,临床意义:AMA-M2对PBC具有诊断意义。 AMA亚型与疾病的相关性: AMA-1:梅毒、干燥综合征 AMA-2:PBC AMA-3:药物性红斑狼疮 AMA-4:PBC与AIH重叠 AMA-5:SLE、自身免疫性溶血性贫血 AMA-6:异烟肼引起的药物性肝炎 AMA-7:AIH AMA-8:AIH、闭塞性血栓性血管炎 AMA -9:药物性肝炎 AMA-10:SLE,分裂期细胞阳性,染色体阳性---染色体相关抗体,相关疾病? 纺锤体纤维阳性---纺锤体纤维抗体,如燕麦细胞型支气管肺癌 中间体阳性---中间体抗体,相关疾病? 细胞两极阳性---中心粒抗体,相关疾病? 着丝点阳性---抗着丝点抗体,抗着丝点抗体(ACA),荧光模式: Hep-2:细胞核细的、相同大小的颗粒荧光,分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。 肝组织片:分布于细胞核的10~20个颗粒,荧光弱,易被忽略。,,抗着丝点抗体,自身抗原:着丝粒中的三种不同的蛋白质:着丝点蛋白A、B、C,主要抗原为着丝点蛋白B。 临床意义:对进行性系统性硬化症亚型(CREST综合征)有诊断意义。阳性率80~95%。还可见于PBC、SS等。,器官/组织特异性自身抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA) 抗平滑肌抗体 抗角蛋白抗体 抗肝肾微粒体抗体 抗肝细胞膜抗原抗体 抗可溶性肝抗原抗体 抗肝特异性蛋白抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体(胞浆型)cANCA,荧光模式: 猴肝:肝血窦区粒细胞强荧光,而肝细胞阴性。甲醛固定的中性粒细胞:胞浆内粗大到细的荧光颗粒。,,抗中性粒细胞胞浆抗体(胞浆型),自身抗原:为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3(PR3)。该靶抗原为可溶性蛋白,存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。 临床意义:cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengener’s肉芽肿,约占ANCA阳性率的80~95%。cANCA被认为是活动性Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。,抗中性粒细胞胞浆抗体(核周型)pANCA,荧光模式: 乙醇固定的中性粒细胞:细胞核周围平滑的带状荧光,细胞核阴性。 猴肝:肝血窦区粒细胞强荧光,而肝细胞阴性。,,抗中性粒细胞胞浆抗体(核周型),自身抗原:主要抗原为髓过氧化物酶(MPO),其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶,组织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。 临床意义:见于多种系统性血管炎。可见于Wengener’s肉芽肿、微多动脉炎、Churg-Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病(RA、SLE、SS、PM/DM)。,抗平滑肌抗体(SMA),荧光模式: 大鼠胃组织,呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光 。 大鼠肾组织,肾小管细胞内原纤维、肾小球膜细胞及血管肌层的荧光。,,抗平滑肌抗体(SMA),自身抗原:主要的靶抗原为肌动蛋白,肌动蛋白可以单体(G-肌动蛋白)或聚合体(F-肌动蛋白)形式存在于微丝中, F-肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密切,而G-肌动蛋白自身抗原则与酒精性肝硬化有关。 临床意义:见于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化。,抗角蛋白抗体(AKA),荧光模式: 大鼠食管,仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。,,抗角蛋白抗体(AKA),自身抗原:丝聚蛋白(filaggrin)为AKA的靶抗原。 临床意义:见于RA,阳性率36~59%,特异性95~99%。还是一个潜在的预后标志,高抗体滴度可能预示着较严重的RA类型。,抗肝肾微粒体抗体(LKM),有三种荧光模式: LKM-1:肝细胞胞浆明显荧光,呈细颗粒到均质状,肾脏近近端肾小管有荧光。 LKM-2:门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强,肾脏近近端肾小管有荧光。 LKM-3:肝和肾均为阴性,灵长类睾丸间质细胞荧光明显。,,抗肝肾微粒体抗体(LKM),自身抗原: LKM-1:细胞色素P450 Ⅱ D6,为50KD蛋白。 LKM-2:细胞色素P450同工酶,药物替尼酸的结合部位 LKM-3:UDP葡萄糖醛酸基转移酶,为55KD蛋白。 临床意义:自免肝按血清学分型可分为三型 Ⅰ型:出现ANA、SMA、肝细胞膜抗体(LMA抗体)为特征。 Ⅱ型:以出现LKM抗体为特征。 Ⅲ型:以出现可溶性肝抗原抗体(SLA抗体)为特征。 LKM-1为Ⅱ型自免肝的血清学标志。LKM-3抗体见于10~15的慢性丁型肝炎患者。,抗肝细胞膜抗原抗体(LMA),荧光模式: 肝细胞膜的线性荧光。,,抗肝细胞膜抗原抗体(LMA),自身抗原:肝细胞膜抗原,可能为26KD蛋白。 临床意义:为非疾病特异性,最常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎Ⅰ型,在非肝病患者,其发生率较低。,抗可溶性肝抗原抗体(SLA),荧光模式: 猴肝组织上,肝细胞明显荧光,呈细颗粒到均质溶解状。大鼠肾组织为阴性。,,抗可溶性肝抗原抗体(SLA),自身抗原:主要的靶抗原为肝细胞角蛋白。 临床意义: Ⅲ 型自免肝的血清学标志。,抗肝特异性蛋白抗体(LSP),荧光模式: 猴肝细胞明显的颗粒状荧光。,,抗肝特异性蛋白抗体(LSP),自身抗原:肝特异性膜脂蛋白,为43KD蛋白。 临床意义:常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎Ⅰ型,在非肝病患者,其发生率较低。,
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