• / 15
  • 下载费用:10 金币  

MTT法 及细胞凋亡检测.ppt

关 键 词:
MTT法 及细胞凋亡检测.ppt
资源描述:
实验八,MTT法检测细胞相对存活率(教材95页)细胞凋亡诱导分析检测技术(教材162页),MTT法检测细胞相对存活率(教材95页),【方法与步骤】 (1)传代5×104个/100ml 人子宫颈癌细胞HeLa于96孔板, 37°C培养过夜; (2)每孔加入不同剂量的大蒜素(1、5、10 ml),每种剂量加三孔,以药物溶剂作对照, 37°C培养0.5h; (3)于各孔加入10ml 5mg/ml MTT, 37°C培养1h; (4)吸弃培养液,各孔加入100ml DMSO,振荡培养板, 37°C培养10min; (5)用酶联仪测定光密度值(以空白调零),通过与对照组比较得到实验组的存活率。【结果与观察】(1)加MTT后,倒置相差显微镜下观察可见黄色的MTT被还原成紫蓝色颗粒,加DMSO后紫蓝色颗粒溶解;(2)各组OD值取平均值后,以下式计算存活细胞百分数:存活细胞%=(OD实验/OD对照)×100%,对照组,,实验组,细胞凋亡诱导分析检测技术,Cell Death,细胞坏死初期,胞质内线粒体和内质网肿胀、崩解,结构脂滴游离、空泡化,蛋白质颗粒增多,核发生固缩或断裂。随着胞质内蛋白变性、凝固或碎裂,以及嗜碱性核蛋白的降解,细胞质呈现强嗜酸性,故坏死组织或细胞在苏木精/伊红染色切片中,胞质呈均一的深伊红色,原有的微细结构消失。在含水量高的细胞,可因胞质内水泡不断增大,并发生溶解,导致细胞结构完全消失,最后细胞膜和细胞器破裂,DNA降解,细胞内容物流出,引起周围组织炎症反应。,表15-2 细胞凋亡和细胞坏死的区别,,图左,正常胸腺细胞;右,凋亡胸腺细胞(注意凋亡小体),Ho.33342与PI荧光双染显示凋亡与坏死细胞(教材168页),【方法与步骤】 (1)传代5×104子宫颈癌细胞HeLa于含有盖玻片的24孔板, 37°C培养过夜; (2)每孔加入5ml的大蒜素,以药物溶剂作对照, 37°C培养0.5~1h; (3)加入PBS,洗细胞5min X 3次; (4)取出细胞爬片,加入50ml荧光染料Heochst 33342/PI混合液, 室温避光放置30min; (5)加入PBS,洗细胞5min X 3次; (6)用吸水纸吸取爬片上的液体,滴加5ml碱性甘油于载玻片上,将爬片上的细胞面向下盖于碱性甘油中,避免产生气泡,树胶封固后荧光显微镜观察。,【结果与观察】,在紫外光激发下,HeLa正常细胞发出柔和的蓝色荧光,凋亡细胞细胞核发出明亮的蓝色荧光,坏死细胞发红色荧光;正常细胞核荧光均匀,而凋亡细胞核凝集的染色质发强蓝色荧光,周围可见带蓝色荧光的凋亡小体。,,
展开阅读全文
  微传网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
0条评论

还可以输入200字符

暂无评论,赶快抢占沙发吧。

关于本文
本文标题:MTT法 及细胞凋亡检测.ppt
链接地址:https://www.weizhuannet.com/p-10905853.html
微传网是一个办公文档、学习资料下载的在线文档分享平台!

微传网博客

网站资源均来自网络,如有侵权,请联系客服删除!

 网站客服QQ:80879498  会员QQ群:727456886

copyright@ 2018-2028 微传网络工作室版权所有

     经营许可证编号:冀ICP备18006529号-1 ,公安局备案号:13028102000124

收起
展开