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选修一课堂填空大肠杆菌和尿素 答案.doc

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1选修一课堂默写(1)班级 姓名 实验 1 大肠杆菌的培养和分离1.培养基的配制(1) LB 培养基是通用的细菌培养基,其中包含水、 NaCl 、 蛋白胨 和 酵母提取液 (如果配制的是固体培养基,还需要加入 琼脂 ) 。(2)培养细菌的培养基中加入一定量 NaCl 的作用是 维持渗透压 。(3)在制备培养基时,还需调节培养基的 pH,细菌通常喜欢 中性偏碱性 的环境,调节 pH 应该在培养基灭菌之 前 (填“前”或“后” ) 。(4)培养基配置完成后,需转移分装到三角瓶、试管中,为了避免发生 污染 ,三角瓶口、试管口不能沾有培养基,因此,分装时必须用 三角漏斗(玻璃漏斗) 。分装完成后,三角瓶口和试管口需要加棉塞,制作棉塞所需的棉花不能用脱脂棉,因为脱脂棉 易吸水,吸水后容易引起污染 。如果有条件,可以用__ 封口膜(橡胶塞、塑料盖)代替棉塞。(4)常见的灭菌方法还有 高压蒸汽 灭菌法和 灼烧 灭菌法等三角瓶、培养皿和试管等器皿的灭菌要在121℃( 1kg/cm 2 压力)下灭菌 15 分钟,这种灭菌方法称为 高压蒸汽 灭菌法。(5)制备培养细菌用的空白试管斜面:LB 液体培养基配好后,加入 琼脂并加热使之 融化 ,在未凝固时,通过三角漏斗(玻璃漏斗) 加入试管(15mmX150mm)中,每支试管 2 ml。试管口加 棉塞 ,并将试管捆在一起,上端加盖一张 牛皮纸(报纸) 纸,灭菌后将试管 斜靠在平放的铅笔上 , 冷却后,固体培养基即成为斜面。2.大肠杆菌的扩大培养将 接种环在酒精灯火焰上烧红后伸入保存有大肠杆菌的试管斜面,待其 冷却后再蘸取大肠杆菌,将其放入三角瓶的液体培养基中,然后将三角瓶用封口膜密封,放到 37℃、每分钟 200 转的 摇床 上 振荡 12 小时。3.大肠杆菌的分离(1) 单菌落 的分离是消除污染杂菌的通用方法,也是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。分离细菌的方法主要有 划线 分离法和 涂布分离法。前者通常使用的工具是 接种环 ,后者通常使用的工具是 玻璃刮刀 。其中操作方法较简单的是 划线 分离法,较容易得到单菌落的是 涂布 分离法。如果要统计活细菌的数目,宜采用 涂布 分离法。(2)划线分离法:将 接种环 烧红并冷却后蘸取大肠杆菌菌液,然后在培养皿的 固体 培养基上连续划线。完成后盖上盖子,然后将培养皿 倒置 ,在237℃的 恒温培养箱 中培养 12~24 小时。由于在划线过程中 接种环 上的菌液逐渐 稀释,因此划线最后部分细菌间的距离逐渐 加大 。经培养后可看到在划线的末端出现不连续的 单菌落 ,这表明细菌已被分离。(3)涂布分离法:先将大肠杆菌菌液 稀释 ,然后取 0.1 ml 稀释度不同的菌液,加到培养皿的 固体 培养基上。再将保存在 70% 酒精中的 玻璃刮刀 放在酒精灯火焰上,待玻璃刮刀上的火焰熄灭后,用其将培养皿中的菌液涂布在培养基平面上。完成后盖上盖子,然后将培养皿 倒置 ,在 37℃的恒温培养箱 中培养 12~24 小时,最后可得到相互分开的 单菌落,这表明细菌已被分离。在适当的稀释度下,可培养得到相互分开的菌落,通常以每个培养皿中有 20 个以内的单菌落 最为适宜。4.大肠杆菌的保存在 无菌 条件下,将大肠杆菌的单菌落用 接种环 取出,再用划线法接种在试管中的 斜面培养基 上,37℃培养 24 小时后,置于 4℃的 冰箱 中保存。实验 2 分离以尿素为氮源的微生物1.尿素又称脲 ,是 蛋白质 降解的产物。土壤中有一些细菌含有 脲酶 ,它们可以将尿素降解为 氨 ,从而为其生长提供 氮源 。在脲酶作用下,尿素分解的化学方程式是: 书 25 页 2.分离以尿素为氮源的微生物所用的培养基中含有水、NaCl、K 2HPO4、 尿素 、 葡萄糖 、琼脂糖和酚红等,其中酚红作为 指示剂,琼脂糖作为 凝固剂,选用琼脂糖而不选用琼脂的原因是琼脂中含有一定量的含氮化合物,不利于以尿素为氮源的微生物的筛选。尿素培养基灭菌时,为防止尿素 分解 ,可将尿素溶液通过 G6 玻璃砂漏斗 过滤,使其无菌。该设备使用前需经过 高压蒸汽灭菌,使用后需用 1mol/L 的 盐酸 浸泡,并抽滤去酸,再用 蒸馏水 清洗至洗出液呈中性,干燥后保存。培养基的其余成分配制好后用 高压蒸汽 灭菌法灭菌,待冷却至 60 ℃时,加入无菌的尿素溶液,混合均匀后待用。同时配置好 LB 固体培养基,灭菌待用。3.制备土壤细菌悬液:在 无菌条件下,将 1g 土样加入有 99 ml 无菌水的三角瓶中, 振荡 10min,即成 10-2土壤稀释液。取上述土壤稀释液 0.5ml 加入有 4.5ml 无菌水 的试管中,震荡制成稀释度 10 -3为土壤稀释液。依次法制备 10-4和 10-5土壤稀释液。取样时,尽量只取 悬液 。4.涂布:取稀释度 10-4和 10-5土壤稀释液各 0.1ml,分别加到有 LB 培养基和 尿素培养基的培养皿中,再将保存在 70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上,待刮刀上的 火焰熄灭 ,在 酒精灯 旁打开培养皿,将菌液涂布到整个平面上。5.培养和观察:涂布后,将培养皿 倒置 ,在 37℃的 恒温培养箱 中培养 24~48 小时。最终在尿素培养基上出现的菌落数要少于 (填“多于” 、 “等于”或“少于” )LB 培养基,而且在尿素培养基上的菌落周围会出现 红 色环带。这是因为尿素培养基中的 氮源 只有尿素,含有 脲酶 的细菌才能利用尿素存活2生长。它们将培养基中的尿素降解为 氨 ,使 酚红 变为 红 色。
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