书签 分享 收藏 举报 版权申诉 / 9

类型14 QNS-SQX二合一检测细则.pdf

  • 上传人:德鲁克管理课堂
  • 文档编号:13492933
  • 上传时间:2022-09-01
  • 格式:PDF
  • 页数:9
  • 大小:363.17KB
  • 配套讲稿:

    如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。

    特殊限制:

    部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。

    关 键  词:
    14 QNS-SQX二合一检测细则.pdf
    资源描述:

    《14 QNS-SQX二合一检测细则.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《14 QNS-SQX二合一检测细则.pdf(9页珍藏版)》请在微传网上搜索。

    1、福建森宝食品集团股份有限公司企业标 准 Q/JCWI 0214 2013 动物性食品中“ QNS-SQX”二合一药物残留检测 酶联免疫吸附法 2013 - 08 - 01 发布 2013 - 08 - 01 实施 福建森宝食品集团股份有限公司 发布 Q/JCWI 0214 2013 1 前 言 本标准按照 GB/T 1.1标准化工作导则 第 1部分:标准的结构和编写给出的规则起草 本标准由公司检测中心提出并审核 本标准起草单位:检测中心 本标准起草人: 张超红 本标准批准人: 黄金兰 本标准于 2013年 8月 1日首次发布。 Q/JCWI 0214 2013 2 修改履历表 版本 章节 条款

    2、 修改内容或记录号 修改人 (起草人) 批准人 修改日期 (发布日期) 实施日期 A/0 全新发布 张超红 黄金兰 2013.8.1 2013.8.1 Q/JCWI 0214 2013 3 动物性食品中“ QNS-SQX”二合一药物残留检测 酶联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了动物可食性组织中 氟喹诺酮类、 磺胺喹噁啉 药 物残留量,酶联免疫检测方法的制样和检测方法。 本标准适用于猪肌肉、鸡肌肉 氟喹诺酮类、 磺胺喹噁啉 药 残留量的测定。 2 试验原理 试剂盒采 用竞争 ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样本中残留的氟喹诺酮类药物、磺胺喹噁啉 和相对应的酶标板微孔条上预包被的

    3、偶联抗原竞争抗氟喹诺酮类药物或抗 磺胺喹噁啉 抗体,加入酶标二抗后,用 TMB底物显色,样本吸光度值与其所含残留物氟喹诺酮类药物或 磺胺喹噁啉 的含量成负相关,与标准曲线比较,再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样本中氟喹诺酮类药物或 磺胺喹噁啉的残留量 。 3 交叉反应率 3.1 氟喹诺酮类药物交叉反应率 诺氟沙星 100% 双氟沙星 84% 恩 诺沙星 100% 氟甲喹 126% 沙拉沙星 107% 达氟沙星 110% 培氟沙星 146% 环丙沙星 110% 依诺沙星 66% 氧氟沙星(消旋体) 58% 左氧氟沙星 10% 噁喹酸 28% 洛美沙星 4% 麻保沙星 4% 3.2 磺胺喹噁啉 交

    4、叉反应率 磺胺喹噁啉 100% 磺胺二甲基嘧啶 3.2% Q/JCWI 0214 2013 4 磺胺甲基嘧啶 1.1% 磺胺甲氧哒嗪 3.4% 磺胺甲基异噁唑 0.9% 磺胺间甲氧嘧啶 0.8% 磺胺噻唑 0.55% 4 设备及试剂 以下所用材料,除特别注明者外,均为分析纯;水为符合 GB/T 6682规定的二级水 。 4.1 设备 微孔板酶标仪 450/630nm 旋转蒸发仪 /氮气吹干装置 均 质器 涡旋仪 离心机 天平:感量 0.01g 刻度移液管 : 10ml 洗耳球 容量瓶: 500ml 聚苯乙烯离心管 : 2 ml 、 50ml 微量移液器:单道 20 200l、 100 1000

    5、l 多道 250l 4.2 试剂 乙腈 (分析纯 ) 正己烷 (分析纯 ) 去离子水 5 试剂盒提供的材料与试剂 5.1 96 孔酶标板 1 块 ( 氟喹诺酮类) 96孔酶标板 1块 ( 磺 胺喹噁啉 ) 5.2 标准 品 6 瓶:( 2ml/瓶) 0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb, 40.5ppb 5.3 高浓度标准品:( 2ml/瓶) 1ppm 5.4 酶标二抗浓缩液 2ml 5.5 抗体工作液 15ml 5.6 底物液 A 液 15ml Q/JCWI 0214 2013 5 5.7 底物液 B 液 15ml 5.8 终 止 液 15ml 5.9

    6、20浓缩洗涤液 40ml 5.10 4浓缩复溶液 50ml 6 溶液的配制 配液 1: 复溶工作液 (用于组织样本 复溶 ) 用去离子水将 4浓缩 复溶 液 按 1: 3体积比进行 稀释( 1份 4浓缩 复溶 液 +3份去离子水) 用于样本的复溶 。 复溶 工作液在 4 ( 39.2 )环境可保存一个月。 配液 2:洗 涤工作液 用去离子水将 20浓缩 洗涤液 按 1: 19体积比进行稀释 ( 1份 20浓缩 洗涤液 +19份去离子水) 用于酶标板的洗涤, 洗涤 工作 液在 4 ( 39.2 ) 环境可保存一个月。 7 样本前处理步骤 7.1 处理任何样本时,都必须注意: a) 实验中必须使用

    7、一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。 b) 实验之前须检查各种实验器具是否 洁 净, 必须使用洁净 实验器具,以避免污染干扰实验结果。 7.2 样本前处理方法 称取 2.00.05g 均质 后的组织样本至 50ml 聚苯乙烯离心管 中, 加入 8ml 乙腈,用振荡器振荡5min,混匀, 3000g 室温( 20-25 /68-77)离心 5min; 移取 2.5ml 上层有机相至 10ml 洁净干燥玻璃试管中, 于 50-60( 122-140)水浴氮气流下吹干; 加入 1ml 正己烷,用涡旋仪涡动 1min,再加入 1ml 复溶工作液 (见配液 1)用涡旋仪 涡动 30s,混匀, 30

    8、00g 室温 ( 20-25 /68-77)离心 5min; 除去上层有机相,取下层水相 50l 用于分析。 8 检测步骤 8.1 测定前应须知: 8.1.1 使用之前将 模具内所有试 剂与酶标板放实验桌回温 至室温( 20-25 /68-77 ) 。 8.1.2 使用之后立即将所有试剂放回 2-8 ( 36-46) 。 8.1.3 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。 8.1.4 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。 8.2 操作步骤: Q/JCWI 0214 2013 6 8.2.1 将所需试剂从

    9、冷藏环境中取出,按照上述方法进行回温,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 8.2.2 取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放回铝箔袋重新真空密封,保存于 2-8 ( 36-46)环境中。 8.2.3 浓缩洗涤液和浓缩复溶液在使用前也需按上述方法回温。 8.2.4 编号: 将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做 2 孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。 8.2.5 加标准品 /样本: 加标准品 /样本 50l 到对应的微孔中。 8.2.6 抗体工作液和酶标二抗浓缩液的混合: 将抗体工作液和酶标二抗浓缩液按 10:1 体积比混合并混匀。(注:此混合液不能保存,混合均匀后立刻进行加样)

    10、 。 8.2.7 加抗体工作液和酶标二抗浓缩液的混合液: 加抗体工作液和酶标二抗浓缩液的混合液 50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板模盖板后 置 25( 77 ) 避光环境中反应 30min。 8.2.8 洗板: 小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加入洗涤工作液 (见配液 2) 250l/孔,充分洗涤4-5 次,每次间隔 10s,泼掉板孔内洗涤液,用吸水纸拍干 (拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破) 。 8.2.9 显色: 加入底物液 A 液 50l/孔,再加入底物液 B 液 50l/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置 25( 77 ) 避光环境中反应 15min(见注意事项 8)。 8.2

    11、.10 测定: 加入终止液 50l/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于 450nm 处(建议用双波长 450/630nm检测,请在 5min 内读完数据),测定每孔 OD 值。 (若无酶标仪, 则不加终止液用目测法可进行判定 )。 9 结果判定 9.1 氟喹诺酮类药物结果判定 氟喹诺酮类药物 结果判定有两种方法,粗略判定可用第 1种方法,定量判定用第 2种方法。注意样本吸光 度 值与 其所含氟喹诺酮 类的含量成负相关 。 9.1.1 用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围 (ppb)。 假设 样本 1 的吸光度值为0.501,样本 2 的吸光度 值为 0.912,标准品吸光度值分别是:

    12、 0ppb 为 1.792; 0.5ppb 为 1.407; 1.5ppb为 1.159; 4.5ppb 为 0.641; 13.5ppb 为 0.245; 40.5ppb 为 0.111。则样本 1 的浓度范围是4.5ppb-13.5ppb 再 乘以其对应的稀释倍数 即可得出样本中氟喹诺酮类药物残留的浓度范围 ;样本 2 的浓度范围是 1.5ppb-4.5ppb再 乘以其对应的稀释倍数 即可得出样本中氟喹诺酮类药物残留的浓度范围 。 9.2 磺胺喹噁啉 结果判定 磺胺喹噁啉 结果判定有两种方法,粗略判定可用第 1种方法,定量判定用第 2种方法。注意样本吸光度 值与 其所含 磺胺喹噁啉 的含量

    13、成负相关。 9.2.1 用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围 (ppb)。 假设 样本 1 的吸光度值为0.301,样本 2 的吸光度 值为 0.901,标准品吸光 度值分别是: 0ppb 为 2.069; 0.5ppb 为 1.619; 1.5ppb为 0.980; 4.5ppb 为 0.384; 13.5ppb 为 0.126; 40.5ppb 为 0.035。则样本 1 的浓度范围是Q/JCWI 0214 2013 7 4.5ppb-13.5ppb 再 乘以其对应的稀释倍数 即可得出样本中 磺胺喹噁啉 残留的浓度范围 ;样本 2 的浓度范围是 1.5ppb-4.5ppb 再

    14、 乘以其对应的稀释倍数 即可得出样本中 磺胺喹噁啉 残留的浓度范围 。 9.2.2 定量分析 1) 百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的 平均 吸光度值(双孔)除以第一个标准 品 ( 0 标准)的 平均 吸光度值,再乘以 100%,即 B 百分吸光 率 ( %) 100% B0 B 标准 品 或样本溶液的平均吸光度值 B0 0ppb标准溶液的平均吸光度值 2) 标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率为纵坐标,以 氟喹诺酮类药物或 磺胺喹噁啉 标准品浓度( ppb)的对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度, 乘以

    15、其对应的稀释倍数即为样本中 氟喹诺酮类药物或 磺胺 喹噁啉 的实际浓度 。 样本稀释倍数 组织样本稀释倍数: 2 倍 10 检测方法灵敏度、准确度、精密度 10.1 试剂盒灵敏度: 0.5ppb 样本最低检测限: 组织 1ppb 10.2 准确度 : 组织 90% 20% 10.3 精密度: 试剂盒的板内、板间变异系数均小于 10% 。 11 注意事项 11.1 室温低于 20 ( 68) 或试剂及样本 的温度 没有回到室温( 20-25 /68-77 )会导致所有标准的 OD 值偏低。 11.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象 。所以洗板拍干后

    16、应立即进行下一步操作。 11.3 每加一种试剂前需要将其摇匀 。 11.4 反应终止液为 高浓度 硫酸,避免接触皮肤。 Q/JCWI 0214 2013 8 11.5 不要使用 超出 有效期的试剂盒 ;也不要使用超出有效期的试剂盒中的任何试剂,掺 杂使用 超出有效期的试剂盒 会引起灵敏度的降低 ; 不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。 11.6 储存条件 保存试剂盒于 2-8 ( 36-46) ,不要冷冻,将不用的微孔板放 回铝箔袋 重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。 11.7 试剂变质的迹象 发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。 0标准 品 的吸光度( 450/630nm)值小于 0.5 ( A450nm0.5 )时,表示试剂可能变质。 11.8 在加入 底物液 A 液和底物液 B 液 后,一般显色 15min 即可。若颜色较浅,可延长反应时间到 20min(或更长),但不得超过 30min。反之,则减短反应时间。 11.9 该试剂盒最佳反应温度为 25 ( 77) ,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化 会直接影响检测结果 。 12 贮藏条件及保存期 贮藏条件:保存试剂盒于 2-8 (36-46 )环境中。 保存期:该产品有效期为 12个月。 _

    展开阅读全文
    提示  微传网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    关于本文
    本文标题:14 QNS-SQX二合一检测细则.pdf
    链接地址:https://www.weizhuannet.com/p-13492933.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    微传网用户QQ群:732276833  微博官方号:微传网官方   知乎号:微传网

    Copyright© 2025 微传网 weizhuannet.com 网站版权所有世界地图

    经营许可证编号:粤ICP备2021046453号   营业执照商标

    1.png 2.png 3.png 4.png 5.png 6.png 7.png 8.png 9.png 10.png


    收起
    展开