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CC趋化因子受体6在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义.doc

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CC趋化因子受体6在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义.doc
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CC趋化因子受体 6在人唾液腺腺样囊性 癌组织中的表达及其临床意义 马晓周 刘麒麟 尹唯凰 王越 于阳 杨刚 于子莹 吉林大学口腔医院口腔颌面外科吉林省牙发育及颌 骨重塑与再生实验室 摘 要: 目的:探讨 CC趋化因子受体 6 (CCR6) 在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达, 阐 明其在人唾液腺腺样囊性癌神经侵袭中的作用机制。方法:利用免疫组织化学染 色 (SP法) 检测30例唾液腺腺样囊性癌患者癌组织 (根据癌细胞是否沿神经束 周围或神经束间浸润生长, 分为神经侵袭组 18例, 非神经侵袭组12 例) 及22 例正常人唾液腺组织中CCR6的表达情况, 分析癌组织中CCR6阳性表达率与患者 临床病理特征的关系。 结果:在30例唾液腺腺样囊性癌组织中 22例 CCR6呈阳性 表达, 阳性表达率为73.33%, 免疫组织化学染色显示CCR6主要表达于癌细胞的 细胞膜和细胞质中;在22例正常唾液腺组织中 CCR6均呈阴性表达, 2 组CCR6阳 性表达率比较差异有统计学意义 (P0.05) 。结论:CCR6在人唾液腺腺样囊性癌的发生发展过程中起重 要作用, 且与其神经侵袭有密切关联。 关键词: 唾液腺腺样囊性癌; CC趋化因子受体6; 免疫组织化学; 神经侵袭; 作者简介:马晓周 (1990-) , 男, 吉林省四平市人, 在读医学硕士, 主要从事 唾液腺肿瘤基础与临床方面的研究。 作者简介:于子莹, 副教授, 硕士研究生导师 (Tel:0431-85579386, E-mail:973351724@qq.com) 基金:吉林省发改委高技术产业化项目资助课题 (2014G075) Expression of CCR6 in adenoid cystic carcinoma tissue of salivary glands and its clinical significance MA Xiaozhou LIU Qilin YIN Weihuang WANG Yue YU Yang YANG Gang YU Ziying Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Tooth Development and Maxillary Reconstruction and Regeneration Laboratory in Jilin Province, Jilin University; Abstract: Objective:To explore the expression of CC chemokine receptor 6 (CCR6) in human adenoid cystic carcinoma tissue of salivary glands, and to clarify the mechanism of CCR6 in the nerve invasion of human adenoid cystic carcinoma.Methods:Immumohistochemical method (SP) was performed to detect the expression of CCR6 in30 cases of cancer tissue of the patients with adenoid cystic carcinoma (including 18 cases in nerve invasion group and 12 cases in non-nerve invasion group) and 22 cases of normal salivary gland tissue.The relationship between the positive expression rate of CCR6 and the clinicopathological features of the patients were analyzed.Results:CCR6 was positively expressed in 22 cases among 30 cases of salivary adenoid cystic carcinoma tissue, and the positive expression rate was 73.33%.The immunohistochemical staining showed that CCR6 mainly expressed in the cell membrane and cytoplasm of cancer cells.All of the 22 cases of normal salivary gland tissue were negative to CCR6 expression;the difference of the positive expression rate of CCR6 between two groups was statistically significant (P0.05) .Conclusion:CCR6 plays an important role in the development of human salivary adenoid cystic carcinoma and is closely related to the nerve invasion. Keyword: adenoid cystic carcinoma; CC chemokine receptor 6; immunohistochemisty; nerve invasion; 腺样囊性癌是唾液腺常见的恶性肿瘤之一, 易沿神经侵袭生长, 常导致患者在 患病早期就出现疼痛、面瘫和麻木等症状[1], 近年来唾液腺腺样囊性癌沿神经 侵袭机制的研究已成为学者关注的热点。CC 趋化因子受体6 (CC chemokine receptor 6, CCR6) 是CC趋化因子配体20 (CC chemokine ligand 20, CCL20) 的受体, 是高度保守的 G蛋白偶联七次跨膜受体。CCR6/CCL20生物轴在胰腺癌、 前列腺癌、结直肠癌、肺癌和血液系统恶性肿瘤的器官特异性转移中发挥着重要 的驱动、导向和定位作用。目前, 国内外关于 CCR6/CCL20生物轴在唾液腺腺样 囊性癌嗜神经侵袭中的作用机制研究尚未见报道。本研究通过检测 CCR6在人唾 液腺腺样囊性癌组织中的表达, 分析其与涎腺腺样囊性癌病理分型的关系, 并 探讨其在涎腺腺样囊性癌神经侵袭中可能的作用机制。 1 资料与方法 1.1 临床资料 选取2013—2016年在吉林大学口腔医院诊断的唾液腺腺样囊性癌患者30例, 其 中男性5例, 女性 25例, 年龄 25~74岁, 平均年龄 53岁。30例患者均经病理 证实, 其中颌下腺来源7例, 腮腺来源7例, 舌下腺来源16例;病理标本均连续 切片, HE 染色, 每例标本选取不同部位切片 5张, 镜下观察若发现 1处或1处 以上癌细胞沿神经束周围或神经束间浸润性生长则为有神经侵袭, 其中神经侵 袭组18例, 非神经侵袭组12例;按照2005年WHO关于腺样囊性癌的病理分类标 准, 30 例唾液腺腺样囊性癌病理标本中筛状型 12例, 管状型10例, 实性型8 例。 收集2016—2017 年在吉林大学口腔医院手术获取的 22例正常人唾液腺标本 作为正常对照组, 其中腮腺 10 例, 颌下腺 8例, 舌下腺4例;所有标本均经 4% 多聚甲醛固定, 石蜡包埋后连续切片, HE染色。 1.2 主要试剂 兔抗人CCR6购自北京博奥森公司, 工作浓度 1∶100;兔源性超敏二步法免疫组 织化学检测试剂盒购自北京中杉金桥公司, 该试剂盒中包含试剂:3%H2O2, 试剂 1 (聚合物辅助剂) , 试剂2 (辣根酶标记抗兔 IgG聚合物) ;浓缩型 DAB试剂盒 购自北京中杉金桥公司, 该试剂盒中包含试剂:浓缩DAB溶液 (20×) , DAB 底 物液;EDTA 抗原修复液 (50×) 购自上海碧云天生物技术研究所。 1.3 免疫组织化学染色 脱蜡、水化组织切片;用EDTA热修复10min (具体步骤参照说明书) ;3%H2O2去离 子水孵育10 min, 以阻断内源性过氧化物酶;PBS冲洗, 2 min×3次;滴加一抗, 4℃孵育过夜, PBS冲洗, 2 min×3次;滴加试剂 1, 37℃孵育10min, PBS 冲洗, 2min×3次;滴加试剂 2, 37℃孵育10 min, PBS 冲洗, 2 min×3次;应用DAB溶 液显色;自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。实验中以 PBS 代替一抗作 阴性对照组。采用 Olympus BX51T显微镜进行观察、拍照。 1.4 结果判定标准 阳性细胞数量积分:无阳性细胞为0分, 阳性细胞≤25%为1分, 26%~50%为2分, 51%~75%为3分, >75%为4分;着色强度积分:无色为0分, 淡黄色为 1分, 棕黄 色为2 分, 棕褐色为 3分。着色强度积分与数量积分相加:0分为 (-) , 2和3 分为 (±) , 4 和5 分为 (+) , 6和7分为 (++) , 其中 (+) 和 (++) 为阳性, (-) 和 (±) 为阴性。 1.5 统计学分析 采用SPSS 20.0 统计软件进行统计学分析。 CCR6 阳性表达率以百分率 (%) 表示, 不同组间及不同临床变量 (性别、年龄、病理分级和嗜神经现象) 患者唾液腺腺 样囊性癌组织中CCR6 阳性表达率比较采用 Fisher确切概率法。 以α=0.05 为检 验水准。 2 结果 2.1 唾液腺腺样囊性癌患者癌组织和正常人涎腺组织中 CCR6 表达 免疫组织化学染色显示:CCR6在唾液腺腺样囊性癌细胞膜和细胞质中呈弥漫性 黄棕色表达 (图1A, 见插页四) , 在正常人唾液腺组织中呈阴性表达 (图1B, 见插页四) 。 30例唾液腺腺样囊性癌患者癌组织中有22例CCR6呈阳性表达, 阳 性表达率为73.33%;22 例正常人涎腺组织中 CCR6均呈阴性表达, 阳性表达率为 0%;2组不同组织中 CCR6阳性表达率比较差异有统计学意义 (P0.05) 。 不同年龄和性别唾液腺腺样囊性癌患者癌组织中 CCR6阳性表达率比 较差异均统计学意义 (P>0.05) 。见表1。 表1 不同临床病理特征唾液腺腺样囊性癌患者癌组织中 CCR6阳性表达率Tab.1 Positive expression rates of CCR6in patients with adenoid cystic carcinoma with different clinicopathological characters 下载原表 3 讨论 腺样囊性癌是唾液腺最常见的恶性肿瘤之一, 具有神经侵袭性的特征。 由于唾液 腺腺样囊性癌常沿神经浸润生长和转移, 常规手术、 放疗和化疗等治疗效果不能 令人满意, 30%~40%的患者在术后2年复发, 因此寻找腺样囊性癌基因治疗有效 靶点对腺样囊性癌的诊治具有极其重要的意义[2]。 趋化因子是一组可溶性的相对分子质量为 8 000~14 000 的小分子蛋白, 与其同 源性G 蛋白偶联受体结合后可引发一系列细胞内反应, 从而促使细胞发生有向 性迁移或趋化行为[3]。趋化因子受体可分为 4类[4]:CXC趋化因子受体 (CXCR) 、CC趋化因子受体 (CCR) 、CX3C趋化因子受体 (CX3CR) 和 XC趋化因 子受体 (XCR) 。趋化因子及其受体在多种恶性肿瘤中呈高表达, 尤其是具有高 转移潜能的细胞中, 因与肿瘤细胞增殖、 转移关系密切而成为目前研究热点, 也 为抗肿瘤侵袭转移的基因靶向治疗提供了全新的研究方向。王堃等[5]研究发 现:CXCR4 在卵巢癌细胞中高表达, 其表达的上调促进上皮性卵巢癌细胞的转移 和侵袭;在唾液腺腺样囊性癌嗜神经侵袭机制的研究中, 有研究[6-7]证实:CCR5 在唾液腺腺样囊性癌标本中呈阳性表达, 且 CCR5/CCL5生物轴在涎腺腺样囊性 癌嗜神经侵袭中发挥着重要作用;杜贵霞[8]研究发现:CXCL12和CXCR4蛋白在具 有神经侵袭现象的人唾液腺腺样囊性癌组织中的阳性表达率高于不具有神经侵 袭现象者, 提示该生物轴可能在腺样囊性癌嗜神经侵袭中发挥着重要作用。 目前 研究[9]显示:CCL20 是CCR6的唯一配体。Andre 等[10]研究发现:乳腺癌组织中 有CCR6 的表达, 且 CCR6高表达与乳腺癌的胸膜转移有关联;也有学者[11-12] 对乳腺癌组织中趋化因子受体的表达情况进行研究发现:乳腺癌组织中有 CCR5 和CCR6 等的表达, 且其表达情况与癌细胞是否转移有关。Lu等[13]证实:CCR6 高表达于喉癌细胞中, CCL20可以明显促进人喉癌细胞株的增殖和迁移。研究 [14-20]显示:CCR6 对肝癌、胃癌、大肠癌和结肠癌的转移和增殖具有促进作用。 本研究结果显示:30 例唾液腺腺样囊性癌患者癌组织中 CCR6的阳性表达率明显 高于正常唾液腺组织, 在不同病理分型、年龄和性别患者癌组织中 CCR6的阳性 表达率比较差异无统计学意义, 神经侵袭组唾液腺腺样囊性癌患者癌组织中 CCR6阳性表达率高于非神经侵袭组。本文作者推测:可能是周围神经释放 CCR6 的配体CCL20, 与腺样囊性癌细胞的 CCR6结合后, 启动癌细胞内运动和侵袭的 信号通路, 促进其向周围神经迁移和侵袭。 本研究为后续人唾液腺腺样囊性癌的 体外研究提供了理论依据。 参考文献 [1]Laurie SA, Ho AL, Fury MG, et al.Systemic therapy in the management of metastatic or locally recurrent adenoid cystic carcinoma of the salivary glands:a systematic review[J].Lancet Oncol, 2011, 12 (8) :815-824. 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