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组织-免疫荧光染色protocol.doc

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组织-免疫荧光染色protocol.doc
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组织免疫荧光步骤:1)取出切片,用 0.01 M PBS冲洗 5min×3 次;2)滴加 10%正常山羊血清 37℃封闭 45 min;3)吸去多余液体,加入抗TSHR的一抗(1:100),放入湿盒中,37℃孵育 1h后置于 4℃冰箱中过夜(保持在湿盒中);4)0.01 M PBS冲洗 5min×3 次;(至下一步开始要适度避光操作,防荧光淬灭!)5)在黑暗条件下加入山羊抗兔IgG-FITC(1:200),37℃温育 45 min;6)在黑暗条件下吸弃二抗 (注:不再冲洗) ,加入DAPI染液(2.5μ g/ml),室温作用 20 min;7)在黑暗条件下 0.01M PBS冲洗 5min×6 次;8)在黑暗条件下防荧光淬灭剂封片,荧光显微镜下观察,用合适波段激发,照相保存实验结果。核实好下边的问题你就可以操作了:1、 准备 0.01 M PBS 500 ml,冲洗时动作既要轻柔防脱片,又要保证冲洗彻底;2、 抗 TSHR 的一抗用 1:100,用抗体稀释液稀释;3、 实验室有没有山羊抗兔 IgG-FITC,使用浓度是 1:200;4、 DAPI 染液(2.5μg/ml)实验室有吗?5、 防荧光淬灭剂封片实验室有吗?
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