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Sebia血清免疫固定SOP.doc

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Sebia 血清蛋白免疫固定标准操作流程一、 实验前的准备耗材:小炮弹管或生化小杯子、加样枪 2 把(5-50ul 和 20-200ul) 、蒸馏水或去离子水 500ml、二、 操作流程:1、打开机器,选择电泳程序“IF” ,选择染色程序“” ,检查1、 血清稀释并混匀泳道 血清(ul) 稀释液(ul)IgG 免疫固定泳道 20 100ELP 参考泳道和其它免疫固定泳道 30 601、 加样梳点样(以 4 人份为例)其中 1、8、15 泳道不加样。3 、10 泳道加各自的 LgG。剩下其余各泳道加样 10μL。加完样的加样梳放置保湿盒内,最后一个样品加完后放至保湿盒内(齿朝上,扩散 5 分钟) 。2、 海绵条放置将海绵条挂在电极丝两端的金属钉上,海绵较凸起部分面向操作人员。4、胶片处理(免疫固定专用胶片、薄滤纸)电泳模块的温控板下方三分之一处用加样枪加 200μL 蒸馏水;从黑色底框边开始放置胶片,使水层与温控板充分贴合,没有气泡;用薄滤纸迅速吸取胶片上多余的水分;放下黑色的运送器,将加样梳插至第 6 齿上,合上机盖。5、 电泳,选择免疫固定电泳程序,开始。6、 加抗血清(抗血清、基准色卡、抗体杯架、推动安装架)扔掉使用过的加样梳和海绵条,移除运送器。将不锈钢固定架置于温控板底端;将抗体杯架装在推动安装架上,再放到胶片和固定架上;照基准色卡对应的孔加相应的抗血清(10μL) 。均匀地将抗血清推到各通道上。7、 孵育(按开始键继续)8、 用厚滤纸(光滑面朝下)充分吸去多余的凝胶后,扔掉厚滤纸,继续至自动烘干。9、 染色、褪色、清洗、烘干取出胶片,用胶片固定架将其固定后插入染色槽,选择免疫固定染色程序,开始。10、 胶片扫描将上一步骤处理完的胶片和固定架插入扫描槽,从电脑操作界面选择扫描操作。
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