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免疫组织化学讲义(xin).doc

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1组织学病理学技术与免疫组织化学课程任课教师:张雷 学时数:20一. 光镜组织病理切片技术(6 学时)(1) 取材注意事项及组织固定法(2) 制片方法:石蜡切片、冰冻切片、铺片、磨片(3) HE染色及特殊染色方法二. 组织化学技术(4 学时)(1) 固定与制片(2) 蛋白质、糖类、脂质及核酸组织化学反应(3) 酶组织化学三. 免疫组织化学技术(10 学时)(1) 免疫学及免疫组织化学的原理和基本技术(2) 常用免疫组织化学方法(3) 免疫酶组织化学技术(4) 免疫电镜技术(5) 原位杂交组织化学(6) 细胞凋亡的过程及相关因素(7) 免疫组织化学结果判定及图象分析(8) 显微照相第一章概论病理学经历了大体器官病理学、细胞病理学、超微病理学、免疫病理学和分子病理学的发展阶段,正在向 21世纪的信息病理学前进。国际著名病理学家Karl lennert教授有句名言:“技术是病理学之母”。回顾过去病理学的重大发展,无一不是新技术的发明与应用的结果。正如程大民院士指出的那样:“病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮,缺一不可,互为依存,互相促进,两者的结合决定着病理学的发展。”病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术,传统的 formalin固定,石蜡切片和 HE染色技术仍然是病理学的基本技术,大量应用于基础和临床病理学日常工作中,保证和提高常规技术质量和现代设备水平十分重要。从传统病理学发展的经验看,器官病理学、细胞病理学以及超微病理学基本都属于形态学。免疫细胞化学虽然是形态、代谢及功能的三位一体的方法,也基本以形态为主,反映一定代谢及功能状态。特别在方法上与传统病理学技术:包埋、制片、染2色基本一致,所以免疫荧光技术虽由微生物学家开端,但很快就在病理学中得到了广泛应用。分子生物学技术向分子病理学技术的发展是“直通车”。其中形态学部分,如分子杂文、原位来交、原位 PCR、末端标记、染色体的变化等,也是由于与传统病理学技术密切结合,不但在病理学研究中,而已在临床病理诊断中迅速得到了应用。此外,目前关于分子病理学工作,除了病理学家外,分子生物学家、生物学家、遗传学家甚至临床学家都在进行研究。所以分子病理学在医学专业教学中应该怎样划归,在医院工作中如何归等,都将可能是面临的实际问题。第一章 病理切片技术:大生物学标本或医学标本在生活状态下多为无色透明,而且组织一旦离开机体后很快就会死亡,其结构就会失去正常状态。所以必须对组织采取固定、切片、和染色措施,由于组织内部结构的不同,在嗜色性能上各有所异,光波通过时,又由于不同颜色再吸收程度上的不同,因此在显微镜下呈现不同的折射率,也就是说经过固定和染色后,光波通过这些被检组织成分时,波长和振幅发生改变,所以在显微镜下才能清晰的观察其组织结构,我们称之为组织制片技术。组织制片技术的应用,从 1665年 HOOK发现细胞开始,以有 300多年的历史。最早应用冰冻切片;随后又进一步利用石蜡的硬度,以石蜡包埋组织,制成石蜡切片,后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性,以其包埋组织而制成切片。 组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可用以显示不用细胞和组织形态,以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。组织制片技术以成为生物学、动物学、组织学、生理学、植物学及病理解剖学和法医学等学科用以研究、观察细胞、组织的生理、病理形态变化的主要方法,也是教学和科研中不可缺少的一个组成部分。第一节 制片的种类一、 组织切片法: 是研究组织学、病理学最为广泛应用的基本方法。任何组织切片都必须依靠切片机将组织切成薄片(厚度以 µm计),再进行染色而得到结果。在切成薄片前必须设法使组织内部渗入足够的支持物质,使组织保持一定的硬度,然后使用切片机进行切片。根据所使用支持物质的不同,切片方法分为:1. 石蜡切片法2. 火棉胶切片法3. 冰冻切片法4. 超薄切片法(电镜技术)二.组织非切片法:不用切片机不经切片手续而制成组织切片的方法。1. 分离标本:将整体或小块组织浸入化学药品配制的分离液内一段时间,溶去3间质成分,然后充分振荡,制成的标本经染色或不经染色,即可观察单个完整的细胞。2. 涂片标本:将骨髓、血液或脱落细胞涂于载玻片上,经固定和染色制成的标本,用以观察细胞形态及微细结构。3. 压片标本:将整体或小块组织经药物处理及染色、撕碎压平于载玻片上所制成的标本。4. 铺片标本:将膜片状组织;如大网膜,肠系膜或皮下疏松结蹄组织铺于载玻片上,经固定及染色等过程制成的标本。5. 磨片标本:将坚硬的组织;如硬骨和牙,不经脱钙磨成薄片,经染色或不经染色制成的标本。6. 血管注射标本:将染色液,如卡红明胶、普鲁士蓝、墨以单色或双色注如血管内,以观察脏器的血管分布及内皮细胞的表面形态。7. 组织印片:将未经固定的新鲜
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