• / 23
  • 下载费用:10 金币  

免疫检测的基础知识-ELISA.doc

关 键 词:
免疫检测的基础知识-ELISA.doc
资源描述:
1免疫检测的基础知识ELISA 是一种免疫测定。免疫测定( immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。1.1 抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后,可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中,抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于 5000 的蛋白质,例如乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 、甲胎蛋白(AFP)等。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的,称为半抗原(hapten) 。例如某些激素、药物等。抗原的反应性取决于抗原决定簇(antigenic determinant) ,或称为表位(epitope) 。一个抗原分子可带有不同的决定簇,例如中可带有等决定簇。 1.2 抗体1.2.1 抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig) 。Ig 分五类,即IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM。Ig 由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig 的轻链是相同的,有 κ(kappa)和 λ(Lambda)两种型别。五类 Ig 的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG 和 IgM 的重链分别称为 γ(gamma)链和 μ(mu )链。IgG 的结构见图。① 木瓜酶裂解部位② 胃蛋白酶裂解部位重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异,称为可变区,分别用VH 和 VL 表示。两者构成抗体的抗原结合部位,只与相应的抗原决定簇匹配,发生特异性结合(见图) ,是抗体专一性结合抗原的结构基础。IgG 可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab) 。每个 Fab 都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称 Fc 段,无抗体活性,但具有 IgG 特有的抗原性。IgG 可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个 Fab 双体,称 F(ab')2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似 Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。IgM 是由五个单体组成的五聚体,含 10 个重链和 10 个轻链,具有 10 个抗原结合价,由于空间位2置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM 分子量约为 900000,IgG 分子量约为 150000。机体被微生物感染后,先产生 IgM 抗体,然后产生 IgG 抗体。经过一段时间,IgM 抗体量逐渐减少而消失,而IgG 抗体可长期存在,在疾病痊愈后可持续数年之久。IgM 抗体一般为保护性抗体具有免疫性。因此 IgM 抗体的测定,对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。下图为为甲型肝炎病人血清中 IgG 抗体和 IgM 抗体出现的时间和水平。1.2.2 抗体的产生机体受抗原刺激后,B 淋巴细胞产生相应的抗体。含有抗体的血清称为抗血清(antiserum) 。每一系 B 细胞只产生针对某一抗原决定簇的抗体。如将多种抗原或含有多个抗原决定簇的抗原注入机体,则将由多系的 B 细胞产生相应的多种抗体,这些抗体均存在于免疫血清中。免疫测定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或马制得。产生抗体的 B 细胞可在体外与繁殖力强的肿瘤细胞融合成杂交瘤细胞。将单个杂交瘤细胞分离,在体内或体外培养而分泌的抗体单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb 或 Mab) 。单克隆抗体仅针对一种抗原决定簇,具有很高的特异性。单克隆抗体通常用抗原免疫小鼠制备。将免疫的脾细胞(含产生抗体的 B 细胞)与小鼠肿瘤细胞融合,分离杂交瘤细胞,接种于小鼠腹腔,产生的腹水中含有浓度很高的单克隆抗体。1.3 抗原抗体反应1.3.1 可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:Ag+Ab→Ag·Ab 抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力,可以用平衡常数 K 表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab](Ag·Ab )的解离程度与 K 值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性,因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗血清中,特异性的 IgG 抗体仅占总 IgG 中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体,称为亲和层析纯抗体,应用于免疫测定中可得到更好的效果。1.3.2 最适比例在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体复合物(沉淀)的量见图 1-4。曲线的高峰部分是抗原抗体比例最合适的范围,称为等价带(zone of equivalence) 。在等价带前后分别为抗体过剩带
展开阅读全文
  微传网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
0条评论

还可以输入200字符

暂无评论,赶快抢占沙发吧。

关于本文
本文标题:免疫检测的基础知识-ELISA.doc
链接地址:https://www.weizhuannet.com/p-6497655.html
微传网是一个办公文档、学习资料下载的在线文档分享平台!

微传网博客

网站资源均来自网络,如有侵权,请联系客服删除!

 网站客服QQ:80879498  会员QQ群:727456886

copyright@ 2018-2028 微传网络工作室版权所有

     经营许可证编号:冀ICP备18006529号-1 ,公安局备案号:13028102000124

收起
展开