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免疫组化13.doc

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2004 级考题1.简述原位杂交组织化学的基本原理。P841.核算的化学组成与基本结构2.DNA 的变性与复性 1)DNA 变性:指 DNA 分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。变性温度:热变性使 DNA 分子双链解开所需温度称为熔解温度。影响 Tm的因素:DNA 的均一性,DNA 分子中的(G+C)含量:溶剂的性质(低离子强度,Tm 低;高 pH;变性剂甲酰胺)2) 复性 :指变性的 DNA(单链)在适当的条件下,两条彼此分开的多核苷酸链又可以重新结合成双螺旋结构.复性的影响因素。温度;DNA 浓度;DNA 片段长度;DNA 分子的复杂性;离子强度。2.简述免疫组化染色 ABC 法的基本原理。P52生物素为含硫的杂环单羧酸,分子量小, 通过羧基与蛋白质的氨基结合,从而可标记抗体和酶。亲和素又称卵白素,是一种糖蛋白,生物素与亲和素有很高的亲和力 1 个亲和素分子上有 4 个生物素结合位点。在 ABC 法中,不对特异性第一抗体进行标记,而用生物素标记第二抗体,染色前按一定比例将亲和素与生物素标记的过氧化物酶混合,制成 ABC混合物,并使亲和素分子上至少空出一个生物素结合位点。染色时标本中的抗原先与第一抗体结合,后者在于生物素标记的第二抗体结合,然后加入 ABC 复合物,结合到第二抗体的生物素上,最后形成的复合物网络了大量的酶分子,因此敏感性更高。3.组织块进行固定的原理是什么?常用的固定方法和固定剂有哪些?P101.原理:应用固定剂使其替代组织中水的位置,并使组织中的蛋白质凝固,使组织小的形态结构和化学成分保持生活状态,防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。2 常用的固定方法:1)浸润法:一次要处理许多组织样品时也多用此法。预先需估计固定剂的用量,并在取材前配好固定液,分装于小容器内,在容器上标记组别和取材时间。2)灌流固定法:此法是经血管途径,将固定液灌注到欲固定的器官内,使生活的细胞在原位及时迅速固定,取下组织之后再浸入相同的固定液内继续固定。3 常用固定剂:1)甲醛 2)丙酮 3)醇类 4)混合固定剂:bouin 液,zamboni 液,AFF 液,5)甲醇 6)乙醇 7)4%多聚甲醛磷酸缓冲液 8)乙醚或三氯甲烷4.何为细胞培养术?举例说明其在生物学医学研究中的应用.5.细胞凋亡的形态学检测方法有哪些?一、普通光学显微镜观察方法 (一)苏木素-伊红染色(HE 染色法) (二)甲基绿-派诺宁染色法 (三) Giemsa 染色 (四)瑞氏( Wright )染色 二、透射电子显微镜观察方法 三、荧光显微镜观察方法 (一)吖啶橙染色法 (二) Hoechst33258 染色法 (三)Hoechst33342 染色法6.何为色温?在显微摄影中常用日光型胶片在灯光下拍照,您将用何种方法调节色温?P184色温: 是指色质,即白光的程度。所谓白光,就是日光、灯光、天空光等。应使用青蓝色滤色镜。7.何为像素?在数码摄影中常考虑的参数是什么?P136;P198像素是构成显示器图像的最基本单元,按行和列(X 和 Y)方向排列成矩列。任何一矩列均对应一个点,这些点称为像素。像素、灰度、色彩、光密度、长度、面积8.酶标抗体免疫细胞化学间接法的基本原理是什么?此法的优缺点是什么?按此方法选择抗体时应注意什么问题?P51原理:第一抗体(兔)不标记,使用与一抗种属相同抗体的 Fc 段(有种属特异性)作为抗原免疫动物(羊) ,制备抗抗体,即第二抗体(羊抗兔) ,并标记第二抗体。染色时,顺次以第一抗体和标记的第二抗体处理标本,在抗原存在部位形成抗原-第一抗体- 标记第二抗体复合物,以达到检测该抗原的目的。间接法因第二抗体的放大作用敏感性大大增高优点:特异性强、敏感度高、应用广泛。缺点较为复杂,速度慢应选用特异性强比活度高的抗体。2007 级考题1.简述形态学研究有哪些主要常用技术?这些技术能解决哪些问题?2.何谓免疫荧光染色,用何种方法消除非特异荧光?P44;P74将荧光素作为标记物,通过免疫学和组织化学的原理对组织或细胞中的大分子物质进行定位、定性和定量的技术。动物脏器粉末吸收法、透析法葡萄糖凝胶 G-50 柱层析法3.ANN VASSAY 检测细胞凋亡的原理、试验流程和结果分析。答:原理:主要是根据细胞凋亡过程中的形态特征改变,细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V 是一种 35-36KD 的钙离子依赖的磷脂结合蛋白,它对 PS 具有较高的亲和力。细胞凋亡时,可以和外翻的 PS 结合,从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的 PS 也外翻,因而也会阳性。因此,还会加一种 DNA 染料,常用的有 P1。由于死亡的细胞膜通透性增高,染料可以
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