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免疫学作业-食品的免疫学检测方法.doc

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免疫学作业-食品的免疫学检测方法.doc
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1食品的免疫学检测方法免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法,其基本原理是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。随着学科间的相互渗透,免疫学涉及的范围不断扩大,新的免疫学检测方法层出不穷。免疫学方法的应用范围亦在日益扩大,不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法,也为众多学科的研究提供了方便。免疫学检测技术是食品检测技术中的一个重要组成部分,特别是三大免疫技术———荧光免疫技术、酶免疫技术和放射免疫技术在食品检测中得到了广泛应用。利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、寄生虫等,还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、抗生素等的检测,其检测方法简便、快速、灵敏度高、特异性强,特别是单克隆抗体的发展,使得免疫检测方法特异性更强,结果更准确。一、 免疫荧光技术免疫荧光技术是一种将免疫反应的特异性与荧光标记分子的可见性结合起来的方法。在一定条件下,用化学方法将荧光物质 (荧光素)与抗体结合,但不影响抗体与抗原结合的活性,与相应抗原结合后,在荧光显微镜下观察抗原的存在与部位,可定位,亦可用荧光计定量。但荧光标记信号较弱,因而检测灵敏度不是很高。免疫荧光分析(Immuno Fluorescence Assay,IFA)始创于 20 世纪 40 年代初,1942 年 Cons 等首次报道用异硫氰酸荧光素标记抗体,检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗体,但此种荧光素标记物的性能较差,未能推广应用。20 世纪 50 年代,Riggs 等合成性能较为优良的异硫氰酸荧光素。Mashall 等对荧光抗体的标记方法又进行了改进,从而使得免疫荧光技术逐渐推广应用。免疫荧光技术在实际应用上主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。免疫荧光直接法可清楚地观察抗原并用于定位标记观察。间接法是在检测样品上滴加已知的细菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标记的第二抗体。1.底物标记荧光测定法2底物标记荧光测定法(SLFIA)使用一种酶的底物标记待测物,底物本身无荧光,在受到相应酶的催化时能转变为荧光物,当标记底物与抗体结合产生的空间位阻阻碍了酶与标记底物间的接触,样品中的待测物通过竞争作用使游离的酶标结合物或荧光强度增加。2.荧光偏振免疫测定法使用偏振光作为激发光时,视分子的运动状态,发射的荧光可能是振动方向随机化的普通荧光,或是只在某一平面振动的偏振荧光(ploarized fluorescence) 。在反应液中,游离的标记物分子体积小,在布朗运动中转动速度快,受偏振光照射后产生的荧光偏振方向被分散,不能产生偏振光,只发射普通荧光;与抗体结合的标记物分子体积增大,布朗运动速度减慢,甚至不能转动而形成定向排列,所以受偏振光激发后能产生偏振荧光,样品中的待测物的量越大,偏振荧光的强度越高。1.荧光淬灭免疫测定法荧光淬灭免疫测定法(Fluoresecent QuenchingImmunoassay)的原理是当荧光标记物与抗体结合后发生荧光淬灭。荧光猝灭的机制尚不清楚,荧光淬灭可能与标记物与抗体结合后导致电子振动状态的改变有关。3 荧光增强免疫测定法荧光增强免疫测定法(Fluoresecent EnhancementImmunoassay)的原理与荧光淬灭增强免疫测定法相似,不同的是标记物与抗体结合后荧光强度增强。二、酶免疫检测技术酶免疫检测技术是 20 世纪 60 年代在荧光和组织化学的基础上发展起来的一种新技术,最初用酶代表荧光素标记抗体作为生物组织中抗原的鉴定和定位。随后发展为用于鉴定免疫扩散及免疫电泳板上的沉淀线。到 1971 年,Engrall等用碱性磷酸酶标记抗原或抗体,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA),这一技术因其高度的准确性、特异性、应用范围广、检测速度快以及费用低等优点,是目前食品检测中令人瞩目的有发展前途的一种新技术。酶免疫技术发展迅猛,种类繁多,酶免疫技术分为酶免疫组化技术和酶免疫测定技术,酶免疫测定技术又分为均相免疫测定技术和异相免疫测定技术,异相免疫测定技术又分为固相免疫测定技术和液相免疫测定技术。固相免疫测3定法的代表技术是酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 。它食品安全检验中最为广泛应用的方法之一。ELISA 是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种高灵敏度的检测技术。ELISA 技术结合了免疫荧光法和放射免疫测定法两种技术的优点,具有可定量、反应灵敏准确、标记物稳定、适用范围宽、结果判断客观、简便完全、检测速度快以及费用低等特点,且同时可进行上
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