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ELISA、Western Blot、免疫组化的具体区别.doc

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ELISA、Western Blot、免疫组化的具体区别.doc
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ELISA、Western Blot 、免疫组化的具体区别免疫组化:是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位) 。样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。elisa(酶联免疫吸附试验):用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体- 酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“ 吸附”的含义。免疫组化和 elisa 所用到的原理 大致相同,只是因为所检测的样品不同,从而在操作方法上有所不同。Elisa 多用于定量分析,其灵敏度非常高。western bolt :先要进行 SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体- 标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量。免疫学三大工具,免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量。以下 western 和 Elisa 的区别不是原创,是找的资料。western blotting 可以看到特异性的条带,但是定量比较烦elisa 可以直接读出浓度,但是如果抗体有非特异性结合,那得到的数值就不可信。WB 只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点 ELISA 做不到ELISA 可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响 WB 所检测的一般是抗原,而 Elisa 抗原抗体都可以检测。WB 所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB 可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而 Elisa 无能为力,一锅端了。WB 所适用的一抗一般是线性位点的,ELISA 线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲,WB 可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而 Elisa 不行。WB 一次处理量就是一块胶版,10-20 个样品最多了。Elisa 一块 96孔板一次可以处理 96 个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB 操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在Elisa 上表现得要好得多。
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