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人含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Ti.doc

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人含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Ti.doc
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1人含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E04729h检测范围:0.312 ng/ml - 20 ng/ml最低检测限:0.08 ng/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人 Tie-2,且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期:6 个月预期应用:ELISA 法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中 Tie-2含量。说明 1. 试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时) ;2-8℃(频繁使用时) 。2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3. 中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗 Tie-2 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 Tie-2 抗体、HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Tie-2 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,计算样品浓度。 2试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板(Assay plate ): 一块(96 孔)。 2. 标准品(Standard ): 2 瓶( 冻干品) 。3. 样品稀释液(Sample Diluent): 1×20ml/瓶。4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent): 1×10ml/瓶。5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent) 1×10ml/瓶。6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody): 1×120μl/瓶(1:100) 。7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin): 1×120μl/瓶(1:100) 。8. 底物溶液(TMB Substrate): 1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液(Wash Buffer): 1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25倍。 10. 终止液(Stop Solution): 1×10ml/瓶(2N H2SO4) 。需要而未提供的试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3. 电热恒温培养箱4. 干净的试管和 Eppendof 管5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器36. 蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存 1. 血清:全血标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8°C 1000 g 离心 15 分钟,或 将标本放于-20℃或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则:2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml,盖好后静置 10 分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为 20 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释 20 ng/ml,10 ng/ml,5 ng/ml,2.5 ng/ml,1.25 ng/ml,0.625 ng/ml,0.312 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度 0 ng/ml,临用前 15 分钟内配制。如配制 10 ng/ml 标准品:取 0.5ml(不要少于 0.5ml)20 ng/ml 的上述标准品加入含 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则:临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100μl) ,实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 10μl生物4素标记抗体加 990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100μl) ,实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如10μl
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