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人β淀粉样蛋白40Aβ40酶联免疫检测.doc

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人β淀粉样蛋白40Aβ40酶联免疫检测.doc
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人 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)酶联免疫检测试剂盒使用说明书 AE91032Hu 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测人 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。用 途:用于人血清、血浆及相关液体样本中 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)水平。向预先包被了人 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)单克隆抗体的酶标孔中加入人 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40),温育;温育后,加入生物素标记的抗 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)抗体。再与链霉亲和素-HRP 结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物 A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人 β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)的浓度呈正相关。试剂盒组成 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片(48) 2 片(96)密封袋 1 个 1 个酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存标准品 8000 pg/ml 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存标准品稀释液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存链霉亲和素-HRP 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存生物素标记的抗β 淀粉样蛋白 1-40 (Aβ1-40)抗体0.5ml×1 瓶 1 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存浓缩洗涤液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存需要而未提供的试剂和器材1. 37℃恒温箱。2. 标准规格酶标仪。3. 精密移液器及一次性吸头4. 蒸馏水,5. 一次性试管6. 吸水纸注意事项1. 从 2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6. 底物 B对光敏感,避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少 0.35ml注入孔内,浸泡 1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求 1.不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。操作程序1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)4000 pg/ml 5号标准品 120μl 的原倍标准品加入 120μl 标准品稀释液2000 pg/ml 4号标准品 120μl 的 5号标准品加入 120μl 标准品稀释液1000pg/ml 3号标准品 120μl 的 4号标准品加入 120μl 标准品稀释液500pg/ml 2号标准品 120μl 的 3号标准品加入 120μl 标准品稀释液250pg/ml 1号标准品 120μl 的 2号标准品加入 120μl 标准品稀释液2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。3. 加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗 β 淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂 A 2) Standard wells: add Standard 50μl and Streptavidin-HRP 50μl; 3) testing Sample wells: add sample 40μl,then add anti –Aβ1-40 -antibody 10μl , Streptavidin-HRP 50μl. closing plate with Closure plate membrane ,incuba
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