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免疫第十八单元.doc

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第十八单元 免疫学检测技术一、血清学技术血清学反应是指在体外进行的抗原抗体结合反应,相关的技术称为血清学技术。(一)沉淀反应 可溶性性抗原和相应特异性抗体以合适的比例结合,在反应体系中出现不透明的沉淀物,这种抗原抗体反应称为沉淀反应。单向免疫扩散、双向免疫扩散、对流免疫电泳、免疫电泳均为沉淀反应。1.单向免疫扩散 制备含特异性抗体的琼脂板。在适当的位置打孔,加相应抗原于孔内。抗原自小孔向四周琼脂中扩散,在适当的位置形成环状的沉淀线。环的直径和抗原的浓度呈正相关。此法常用于人或动物血清免疫球蛋白和补体成分的测定。2.双向免疫扩散 在琼脂板上按一定距离打孔。在相邻的两孔中分别加入抗原和抗体。抗原和抗体在琼脂中扩散,当二者相对应时,可在两孔间的适当位置形成由免疫复合物组成的沉淀线。此法常被用于抗原或抗体的定性。3.对流免疫电泳 将两端各打一排孔的琼脂板置电泳槽中,在阴极一侧的孔中加抗原,阳极一侧孔中加抗体,通电使抗原抗体分子泳动,当二者相对应时,可于一定时间后在两排孔之间形成沉淀线。对流电泳是电场作用下的双向免疫扩散。4.免疫电泳 先将待测抗原样品做琼脂糖凝胶电泳,使不同的组分依电泳速度不同而分散开。然后在样品泳道一侧的适当距离处挖一和泳道平行的直线沟槽。于槽内加入已知抗体(一种或多种)。让抗原和抗体进行双向免疫扩散,在泳道和槽的中间形成沉淀线。此法可用于免疫球蛋白缺乏或增多疾病的诊断和鉴别诊断。(二)凝集反应 颗粒性抗原(细菌、红细胞、偶联抗原的乳胶颗粒)与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象,此称为凝集反应。1.直接凝集 直接凝集是颗粒性抗原(细菌、红细胞)与相应抗体结合产生的凝集反应。利用直接凝集可鉴定细菌和血型。2.间接凝集 将可溶性抗原或抗体包被在红细胞或乳胶颗粒载体表面后,与相应抗体或抗原作用出现的凝集。采用红细胞为载体的间接凝集称间接血凝。采用乳胶颗粒为载体的凝集称为乳胶凝集。以包被抗原检测抗体的间接凝集称为正向间接凝集。以包被抗体检测抗原的间接凝集称为反向间接凝集。用此法可检测乙型肝炎表面抗原和甲胎蛋白等。【历年真题解析】1. 血清中常规检查检测不到的 HBV 标志物是 (2004)A HBsAgB HBeAgC HBcAgD 抗-HBeE 抗-HBc答案:C解析:目前临床诊断乙型肝炎最常用的是检测 HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 和抗-HBc,俗称“乙肝两对半”。核心抗原(HBcAg)存在于 Dane 颗粒核心结构的表面,为内衣壳成分,其外被 HBsAg 所覆盖,因此在周围血中很难检测到。2. 骨肉瘤病人可出现 (2002)A 血酸性磷酸酶升高B 血碱性磷酸酶升高C 血 CEA 升高D 血 AFP 升高E 血 VCA-IgA 抗体升高答案:B解析:血清学检查中,肝癌、骨肉瘤时血清碱性磷酸酶可升高。3. 体液免疫测定是指 (2001)A 皮肤迟发型超敏反应B 血清谷丙转氨酶测定C 血清免疫球蛋白测定D 血清 β-微球蛋白测定E 硝基四唑氮兰还原试验答案:C解析:体液免疫测定是检测体液免疫功能的一种方法,主要用于血清免疫球蛋白测定二、免疫标记技术(一)免疫荧光 免疫荧光技术是用荧光素标记的抗体或(抗原)分子检测相对应的抗原或抗体分子的技术。1.直接荧光法 把荧光素标记的抗体与待检标本(细胞悬液、细胞涂片或组织切片)相互作用,洗去未结合荧光标记抗体,在荧光显微镜下观察,有荧光的部位为阳性。2.间接荧光法 将特异性抗体(一抗)和待检标本(细胞悬液、细胞涂片或组织切片)相互作用后,加入荧光索标记的一抗的抗体(二抗)显示结果。免疫荧光法在病原体的诊断、细胞表面标志的鉴定等方面用途广泛。流式细胞仪(FACS)是用于分离、鉴定荧光素标记单克隆抗体识别细胞的仪器。(二)放射免疫分析 根据竞争结合原理,应用放射性核素标记的抗原与相应的抗体(抗原)结合,通过抗原抗体复合物的放射性活性判断结果称放射免疫分析。该方法最敏感。1.液相法 将待检标本(含抗原)与定量的放射性核素标记的已知抗原和定量的特异抗体混合,经一定时间的作用后,分别测定免疫复合物和游离部分的放射性。根据用非标记抗原作成的标准曲线,可确定待检样品中相应抗原的含量。 2.固定法将吸附到固相载体表面的抗原与待检标本(含抗体)作用,然后加标记抗体。测定结合于固相载体的放射性,判定结果。 放射免疫分析法在激素、药物、抗体、维生素的测定等方面应用广泛。【历年真题解析】1.检测血清中一种微量的小分子肽,下列方法中最敏感的是A.免疫荧光技术B.放射免疫分析法C.双向琼脂扩散法D.单向琼脂扩散法E.对流免疫电泳答案:B解析:放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)是以放射性核素为标记物的标记
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