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1大豆异黄酮的提取与含量测定摘 要 大豆异黄酮是一种从大豆种子中分离出的具有异黄酮类化合物结构的主要活性成分。广泛应用于食品及医药行业。利用超声波法提取大豆种子中大豆异黄酮,文献资料表明,乙醇浓度为 75%,料液比为 1∶15,提取时间为 30 min,为大豆异黄酮的最佳提取工艺。以染料木素为标准品,在其紫外最大吸收峰 260nm 处,用紫外分光光度法测定从大豆中提取的异黄酮的含量。关键词 超声波 大豆异黄酮 紫外分光光度法1 前 言大豆异黄酮( soybean inflavones) 是大豆等豆科植物生产过程中形成的一类次生代谢物,是生物黄酮中的一种,被称为“植物雌激素” 。大豆异黄酮在大豆中含量为 0. 1% ~ 0. 5%,主要分布于大豆种子的子叶和胚轴中。近年来研究发现,大豆异黄酮具有很强的生理活性。其对治疗心血管疾病、癌症、骨质疏松症、糖尿病、肾病、早老性痴呆症、妇女更年期综合症以及促进生长发育,提高机体免疫力等方面均有很好的作用。但自然界中异黄酮的资源十分有限,因此如何提高大豆异黄酮的提取率便显得非常重要。本研究致力于摸索大豆异黄酮提取工艺的研究,对大规模生产大豆异黄酮具有重要的借鉴意义。1.1 实验目的 了解大豆异黄酮的作用及其健康价值掌握从大豆中将异黄酮提取的技术和紫外分光光度法测定其含量2掌握超声波清洗器、紫外可见分光光度计的使用方法及理解其原理1.2 实验原理 随着现代科学的发展,超声技术已得到广泛应用。很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的影响。以染料木素为标准品,在其紫外最大吸收峰 260nm 处,用紫外分光光度法测定大豆豆粕中异黄酮的含量。回归方程 A=0.1676X- 0.0118 r=0.9982,平均回率为 99.84%,相对标准偏差为 1.03%。方法简便、重现性好,使用的试剂毒性小且廉价易得,可作为检测大豆中异黄酮含量的一种手段。1.3 实验设备 电子天平 电热干燥箱 超微粉碎机 超声波清洗器 旋转蒸发仪 紫外可见分光光度计1.4 实验材料及试剂 大豆 75%乙醇 95%乙醇 染料木素标准品(Sigma 公司)含量为 98%。2 操作步骤 1.称量大豆 20g,干燥,粉碎,备用。2.取步骤一成品大豆粉 10g,放在 250ml 的锥形瓶中,加进浓度为 75%的乙醇200ml。3.将三角瓶放入已设好功率的超声清洗机(功率为 450W)中进行超声提取,定时 30min 取出, 将粗提液进行旋蒸, 取得异黄酮制品。4.准确称取 120℃干燥至恒重的染料木素 5mg 置于锥形瓶中,用 95%乙醇溶解,然后倒进 50ml 的容量瓶,并定容至刻度,摇匀。5.分别用移液管准确吸取 0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL 标准溶液分别置于 50mL 容量瓶中,并各加入 95%乙醇 1.0mL,再加蒸馏水稀释至刻度,摇匀。3以 1mL95%乙醇加水到 50mL 作空白对照。在 260nm 处测吸光度,染料木素的浓度 C 以 μg/mL 为横坐标,吸光度 A 为纵坐标绘制标准曲线。6.将步骤三的制品,加 95%乙醇溶解,定容至 50mL 容量瓶中,作为储备液。准确吸取储备液 2mL 置 50mL 容量瓶中,加 95%乙醇 1.0mL 定容至刻度,摇匀。作平行样 3 份。7. 取已经制备好的三份平行待测液,每份样品按测定程序测定 2 次,以染料木素计量样品中大豆异黄酮含量。3 结果及计算计算大豆异黄酮含量参 考 文 献1.田琳 尉震 石军 戴龙华《超声波法在大豆异黄酮提取中的应用》2.牡丹江市产品质量监督检验所 黄莉 黑龙江北大荒马铃薯产业有限公司 陈美荣《紫外分光光度法测定豆粕中大豆异黄酮的含量》4附件 1广东医学院大学生科技学术节之生物化学实验技能大赛报名表所在学院名称 公共卫生学院参赛作品题目 大豆异黄酮的提取与含量测定姓名 骆珊 所在系或专业 预防医学组长资料联系手机15818202261691246E-mail 地址 398233398@qq.com姓名 性别 年级/专业 手机号 短号罗越文 男 09 级预防医学 15818479965 697450组员信息资料郑扩 男 09 级预防医学 15818223734 690966所需仪器药品清单(自备药品需写明)仪器名称 仪器规格 仪器数量 药品名称 药品规格药品数量电子天平 实验室为准 1 75%乙醇溶液 适量电热干燥箱 实验室为准 1 95%乙醇溶液 适量超微粉粹机 实验室为准 1 染料木素标准品(Sigma 公司)含量为 98%10ml(自备)超声波清洗器45
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