Mc1-11.ppt

蛋白MCI－１表达对黑色素细胞增殖侵袭的影响,RNA干扰抑制机制,作者,09七年儿科 2009210051 轩兴田2009210069 封叶2009210075 黄梦媛2009210084 刘星宇2009210093 文珊2009210100 杨盼,研究背景,黑色素瘤（malignant melanoma,MM）是一种高度恶性的肿瘤，多发生于皮肤，国外统计占所有恶性肿瘤的1%~2%，在癌症死亡病例中，MM约占1%。且发病率有逐年上升的趋势。其转移早而广发，而且对常规放化疗效果欠佳，是一种临床治疗上颇为棘手的恶性肿瘤。,,,P53,p53是迄今为止发现的最重要的肿瘤抑制因子，它在人类50%以上的肿瘤细胞中都发生了各种不同程度的突变。但在黑色素瘤中，p53在多数情况下并不发生突变而且含量高，不具有抑制肿瘤的能力，甚至在某些药物作用下，p53还起到保护肿瘤的作用。因此，黑色素瘤对大多数肿瘤治疗药物具有明显的抗性作用，治疗效果很不理想，这一“反常”现象长期困扰着科研人员。,微小ＲＮＡ１４９＊分子,ＲＮＡ１４９＊是一种依赖肿瘤抑制因子ｐ５３的分子，在黑色素瘤中，通过ｐ５３调控该小分子的含量，经过一系列信号传导，最终增加抑制细胞凋亡的蛋白MCI－１的含量，从而使黑色素瘤细胞得以生存，这就揭示了黑色素瘤形成的机制。,黑色素瘤的一个发生机制,P53 → RNA149*分子 → 抑制细胞凋亡蛋 白MCI-1 → 黑色素细胞得以生存,,,,研究目标,运用RNA干扰技术，研究基因沉默后对黑色素瘤细胞生长，侵袭能力的影响。,设想1—使P53沉默,P53 → RNA149*分子 → 抑制细胞凋亡蛋 白MCI-1 → 黑色素细胞得以生存,,,,,设想1—使P53沉默,P53 → RNA149*分子 → 抑制细胞凋亡蛋 白MCI-1 → 黑色素细胞凋亡,,,,可是，这里有个问题,P53—抑癌基因是生物体内一种抑制细胞转变癌细胞的基因。 一旦p53基因发生突变，P53蛋白失活，细胞分裂失去节制，发生癌变，人类50%恶性肿瘤中该基因发生突变失活。 我们若使抑癌基因沉默，那就可能诱发新的肿瘤。,设想2—使MCI-1沉默,P53 → RNA149*分子 → → 抑制细胞凋亡蛋 白MCI-1 → 黑色素细胞得以生存,,,,,黑色素瘤的一个发生机制,P53 → RNA149*分子 → 抑制细胞凋亡蛋 白MCI-1 → 黑色素细胞凋亡,,,,,研究思路,确定目的基因 ↓ 设计siRNA序列↓ siRNA基因真核表达载体的构建与鉴定↓ 转染黑色素瘤细胞，筛选稳定表达干扰载体的黑色素瘤细胞株↓ 检测黑色素瘤细胞增殖水平的变化↓ 检测黑色素瘤细胞MCI-1蛋白分子量的变化↓ 黑色素瘤细胞体外侵袭力测定,,,确定目的基因：MCI-1,1 gggaagtcct cgcctgcgtc agcacggccc taaggcggcg gcagggaacg gccttcctca 61 ctcctgactt ccgcctgcct ccggtctgga gtcgcggcct tccccgctcc ttcccctcag 121 cctgcggcgt ccgaccatgt ttggcctgcg gagaaacgcg gtcatcggct tgaacctgta 181 ctgcggcggc gccagcctcg gcgcgggcgg cggttctccg gcaggggcgc gcctggtggc 241 cgaggaggcc aaggcgcggc gcgagggggg aggggaggcc gccctgctgc ccggcgcgcg 301 ggtggtcgcc cggccgccgc ccgtgggcgc cgaggacccc gacgtcaccg cgtcggccga 361 aaggcggctg cataagtcgc ccggcctcct cgccgtgccg cccgaggaga tggccgcgtc 421 ggccgccgcc gccatcgtgt ctccggagga ggaactggac ggctgcgagc cggaggccat 481 cggcaagcgc ccggccgtgc tgcccctcct ggagcgcgtg agcgaggcgg ccaagagctc 541 cggggccgac ggctctctgc cctccacgcc gccgccgccc gaggaggaag aggacgacct 601 ataccgccag tcgctggaga tcatctcgcg ctacttgcgg gagcaggcga ccggctccaa 661 ggactcgaag cctct