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第十七章_革兰阴性菌.ppt

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第十七章_革兰阴性菌.ppt
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格兰阴性球菌,,奈瑟菌属(Neisseria) 布兰汉菌属(Branhamella),概述,“伯杰鉴定细菌学手册”第9版 将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4,将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科 奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(N.meningitidis)以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌(M.catarrhalis)是主要的致病菌。 目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论,一、分类,脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌对人致病 寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌,一 、奈瑟菌属,1.形态,革兰阴性双球菌 直径0.6~1.5μm形似双肾或咖啡豆样,凹面相对 无动力,无芽胞,某些菌种形成荚膜,,2.培养特性,需在培养基中添加羊血、兔血或血清,对脂肪酸敏感,在培养基中需加入可溶性淀粉。 需氧生长,初次分离需5%~7%CO2和高湿度 最适生长温度为35~37℃,低于30℃不生长,,血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、半透明、边缘整齐、湿润奶油状菌落 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长,无菌膜 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶,3.生化特性,氧化酶阳性,触酶阳性(除延长奈瑟菌外) 分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同,常作为菌种间的鉴别依据 奈瑟菌属DNA中G+Cmol%为46~54,抗原构造、抵抗力,依据荚膜多糖的抗原成分可分为:A、B、C、……等13个血清群,我国A群占95.8%,其余为B、C等群。,4.抵抗力,对寒冷、干燥和热的抵抗力弱,对化学消毒剂敏感 对青霉素敏感 但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多,1.致病物质,荚膜:抵抗吞噬的作用,利于细菌在体内的存活和繁殖 菌毛:粘附于黏膜上皮细胞,利于定植 内毒素:可引起发热、微循环障碍,严重者可致内毒素休克、血栓、DIC等,所致疾病,流行性脑脊髓膜炎(人类是唯一的易感宿主)冬末春初,多为学龄儿童、青少年 感染后多为隐性感染,早期,有上呼吸道症状,少数可发展为菌血症或败血症,进而累及脑、脊髓膜,形成化脓性脑膜炎 可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激症阳性、甚至休克和DIC等;菌血症和细菌的损伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑,主要侵犯蛛网膜,脑膜炎奈瑟菌,鼻咽腔繁殖,繁殖入血,菌/败血症,中枢神经系统,暴发型脑膜炎,,,,,,微循环衰竭、内毒素休克、DIC,,免疫性 6月~2岁年龄组婴儿免疫力最低,是易感人群 病后可获得体液免疫,四、微生物检验,,脑膜炎奈瑟菌,标本采集无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本 采集后立即送往实验室 用血平板进行床边接种后置35℃孵育 血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育 标本运送时需要35℃保温,脑膜炎奈瑟菌检验程序,,,CO2环境,,形态学鉴定 生化鉴定 血清学鉴定,标本直接检查,直接涂片检查 脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片 皮肤瘀点渗出液涂片 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌,可报告“检出革兰阴性双球菌,疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断,,抗原检查 通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验 包括A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体 检测结果应结合涂片和培养结果,抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断,分离培养鉴定,脑脊液标本 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板 咽拭子或鼻咽拭子 接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、New York City(NCY)等培养基 血液标本 经增菌培养基增菌培养后,移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上 置5%~7%CO2 35℃孵育,每隔24h观察平板,鉴定,初步确定为奈瑟菌属 直径1~2mm,灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落 涂片革兰染色见阴性双球菌 氧化酶试验阳性 进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌 用分型血清确定血清型别 平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报告为阴性,防治原则,综合性预防措施 隔离病人、检查带菌者、预防性投药,室内通风 流脑疫苗: 6个月-2岁接种两次,间隔1月 A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗 青霉素、磺胺大剂量治疗,二、淋病奈瑟菌 N. gonorrhoeae,G-双球菌,似一对咖啡豆。 有菌毛,有荚膜,专性需氧,巧克力血琼脂平板,2.培养特性,1.形态与染色,3.抵抗力,弱:热、冷、干燥和消毒剂极敏感,1%石炭酸 3 min或1:4000硝酸银2 min即死亡。本菌能自溶。,(一)生物学性状,1.致病物质,荚膜:利于细菌在体内的存活和繁殖 菌毛:粘附作用;抵抗吞噬 外膜蛋白Ⅱ:有助于粘附 IgA蛋白酶:能破坏黏膜表面sIgA 内毒素:损害人体黏膜的重要因素,(二)致病性与免疫性,,,1.淋病,人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主,属性传播疾病(exually transmitted disease ,STD) 主要通过性接触引起泌尿道和生殖系统炎症。,,,2.所致疾病,gonorrhea,,,,2.新生儿淋菌性结膜炎/新生儿脓漏眼,,新生儿由产道感染有淋病性阴道炎或子宫颈炎的孕妇,胎儿经产道娩出时可被感染。,3.淋病奈瑟菌性结膜炎及幼女阴道炎,,,2.所致疾病,通过毛巾、浴池间接感染。,,1.标本,,2.直接涂片镜检,中性粒细胞内发现G-双球菌有价值。,3.分离培养与鉴定,,,泌尿生殖道脓性分泌物,用无菌棉拭沾取,子宫颈口表面分泌物,标本采集后应注意保暖保湿,立即送检接种。,巧克力色平板,5-10%二氧化碳,(三)微生物学检查法,,4.快速诊断,SPA协同凝集实验、ELISA检查标本中细菌;核酸杂交及PCR检测淋病奈瑟菌质粒DNA等。,,,防,开展防治性病的知识教育,防止不正当的两性关系,,治,新生儿1%硝酸银滴眼。,,,,抗生素。参考体外药敏试验。 对青霉素、头孢胺噻肟钠、环丙沙星、壮观霉素等多种抗生素敏感,近年报告耐药菌株增多。,(四)防治原则,,卡他莫拉菌培养及鉴定,在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好 35℃ 24h孵育后菌落直径1~3mm,灰白色、光滑,用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动 氧化酶和触酶阳性 不发酵葡萄糖和其它糖类产酸 大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。 三丁酸甘油酯水解(丁酸酯酶)试验阳性可与奈瑟菌属鉴别 可产生诱导型β内酰胺酶,奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定,,,思考题,简述葡萄球菌的生物学特性 简述链球菌的生物学特性 金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌引起化脓性炎症的特点有何不同,为什么? 哪些方法可以检测金黄色葡萄球菌引起的食物中毒? 对脑膜炎奈氏菌应如何进行分离培养(为何需要床边接种)?。 根据涂片染色镜检可作出微生物学初步诊断的病原性球菌有哪些?,
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