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鸡白介素12(IL-12P70)酶联免疫分析.doc

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鸡白介素12(IL-12P70)酶联免疫分析.doc
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鸡白介素 12(IL-12/P70)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E12836C 检测范围:15.6 pg/ml - 1000 pg/ml最低检测限:3.9 pg/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的鸡 IL-12/P70,且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期:6 个月预期应用:ELISA 法定量测定鸡血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中 IL-12/P70 含量。说明 1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时) ;2-8 ℃(频繁使用时) 。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。概述白细胞介素 12(interleukin 12,IL-12) 主要由 B 淋巴细胞产生。IL-12 是由二硫键联接的异源双体,两个亚单位的分子量分别为 35kDa 和 40kDa,等电点在 pH4.5-5.5。人 IL-12 P35 亚单位有 197 个氨基酸残基,含 7 个半胱氨酸和 3 个 N 糖基化位点。P40 亚单位 306个氨基酸残基,有 10 个半胱氨酸,4 个 N-糖基化位点。在生理情况下,亚单位中的半胱氨酸残基之间可能形成复杂的分子间二硫键结构。两个亚单位是由不同的基因所编码。P35 与 IL-6 和 G-CSF 有同源性,P40 与 IL-6 受体、睫状神经营养因子 (CNTF)受体、G-CSF 受体有同源性,具有细胞因子受体家族的特征。提示 IL-12 分子可能是一种细胞因子/可溶性细胞因子受体复合物。人 IL-12 作用有种属特异性。 IL-12 具有多种生物学功能,首先能与 IL-2 协同诱导 CTL 的分化,促进同种异体 CTL 反应;刺激 PHA 活化 CD3+T 细胞(包括 CD4+和 CD8+) 增殖;协同 IL-2 诱导 CD56+NK 细胞增殖以及 LAK 细胞产生,促进ADCC 功能,NKSF 释放,诱导 CD56、CD2、CD11a 、IL-2R、TNFR(CD120b)、LFA-1 和ICAM-1 等分子的表达;促进 B 细胞 Ig 产生和 Ig 类型转换,由 IgM 转为 IgG,抑制 IL-4诱导 B 细胞 IgE 合成。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗 IL-12/P70 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 IL-12/P70 抗体、HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 IL-12/P70 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板(Assay plate ):一块(96 孔) 。 2. 标准品(Standard):2 瓶(冻干品) 。3. 样品稀释液(Sample Diluent ):1×20ml/瓶。4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent ): 1×10ml/瓶。5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/ 瓶(1:100)7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液(Wash Buffer ):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4) 。需要而未提供的试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3. 电热恒温培养箱4. 干净的试管和 Eppendof 管5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6. 蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存 1. 血清:全血标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20 ℃ 或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心15 分钟,或将标本放于-20 ℃ 或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶
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