• / 3
  • 下载费用:10 金币  

鸡Hsp27 IgG抗体酶联免疫分析.doc

关 键 词:
鸡Hsp27 IgG抗体酶联免疫分析.doc
资源描述:
鸡 Hsp27 IgG 抗体酶联免疫分析本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E12884C最低检测限:1 ng/ml特异性:本试剂盒可检测鸡 Hsp27 IgG 抗体,且与其他相关抗体无交叉反应。有效期:6 个月预期应用:ELISA 法半定量测定鸡血清、血浆或其它相关生物液体中 Hsp27 IgG 抗体含量。说明 1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时) ;2-8 ℃(频繁使用时) 。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理用纯化的 Hsp27 包被酶标板,制成固相载体。向微孔中先加入待测样品进行反应,然后再加入辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 进行反应,经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Hsp27 IgG 抗体呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,计算样品中抗体的效价(抗血清最终能显色的最高稀释倍数记为效价) 。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板(Assay plate ):一块(96 孔) 。 2. 样品稀释液(Sample Diluent ):1×20ml/瓶。3. 辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 稀释液 (HRP-anti-chicken IgG Diluent):1×10ml/瓶。4. 辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG(HRP-anti-chicken IgG):1×120μl/ 瓶(1:100) 。5. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 6. 浓洗涤液(Wash Buffer ):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 7. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4) 。需要而未提供的试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3. 电热恒温培养箱4. 干净的试管和 Eppendof 管5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6. 蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存 1. 血清:全血标本请于室温放置 2 小时或室温过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20 ℃ 或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心15 分钟,或将标本放于-20 ℃ 或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算抗体效价时,稀释了“N” 倍,标本中抗体的效价为“N” 。辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100μl) ,实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 10μl 辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 加 990μl 辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。1. 加样:分别设空白孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 50μl,余孔加待测样品50μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁。2. 轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应 30 分钟。3. 温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,每次浸泡 1-2 分钟,200μl/每孔,甩干。4. 每孔加辣根过氧化物酶标记抗鸡 IgG 工作液 50μl(取 1μl 生物素标记抗体加 99μl 生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制) 。5. 轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应 30 分钟。6. 温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,每次浸泡 1-2 分钟,200μl/每孔,甩干。7. 依序每孔加底物溶液 90μl,37℃ 避光显色(30 分钟内,此时肉眼可见孔内有明显蓝色,即可终止) 。8. 依序每孔加终止溶液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。9. 用酶联仪在 450nm 波长依序测量各孔的光密度( OD
展开阅读全文
  微传网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
0条评论

还可以输入200字符

暂无评论,赶快抢占沙发吧。

关于本文
本文标题:鸡Hsp27 IgG抗体酶联免疫分析.doc
链接地址:https://www.weizhuannet.com/p-8741866.html
微传网是一个办公文档、学习资料下载的在线文档分享平台!

微传网博客

网站资源均来自网络,如有侵权,请联系客服删除!

 网站客服QQ:80879498  会员QQ群:727456886

copyright@ 2018-2028 微传网络工作室版权所有

     经营许可证编号:冀ICP备18006529号-1 ,公安局备案号:13028102000124

收起
展开