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羟丁酸脱氢酶(HBDH) 紫外动力法.doc

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羟丁酸脱氢酶(HBDH) 紫外动力法.doc
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项 目 羟丁酸脱氢酶( HBDH)方 法 紫外动力法目 录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录 A: 参数1. 检测原理NADH 在 340nm 波长有最大吸收, NADH 生成 NAD+的速率与血清中 α-HBDH的活性成正比。在 340nm 波长下测定 NADH 下降的速率,既吸光度下降的速率,既可测出 α-HBDH的活力。α-HBDHNADH +α-酮丁酸 + H+----------------α-羟基丁酸 + NAD+2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:病人空腹 12h,不饮酒 24h 后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前 24 小时内不做剧烈运动。2.2 静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐 5 分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过 1 分钟,穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂:血浆使用肝素或 EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。2.4 标本处理:血标本室温放置 30min~45min 后离心分离血清或血浆,在两小时内检测完毕;如两小时内不能检测完毕,将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖 2-8℃保存。3.试剂3.1 试剂:本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司 HBDH 试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:组 成R1:R2=5:1混合后溶液的浓度R1: Tris 缓冲液: 50mmol/L PH=7.5α-酮丁酸 3.3mmoll/L叠氮钠 0.1%R2: 起动液NADH 0.18mmol/L稳定剂3.2:校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的 40 项校准血清。校准频次:空白定标:每日需做试剂空白定标。全点定标:试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围,需要全点定标。3.3 试剂、校准血清的稳定性:原包装试剂储存在 2-8℃至标签所示失效日期。18-22℃ 稳定 28 天,试剂应避免污染。当试剂空白吸光度低于 1.0 时,试剂按照失效处理。多项校准血清在 2-8℃储存至标签所示失效日期,复溶后-20 ℃保存,可稳定一个月,只可冻融一次,避免反复冻融。参见校准血清说明书。4.仪器KONELAB 30 型号仪器。性能:波长 340nm,仪器测定吸光度的灵敏度应达到 0.001ABS 以上。5.操作样品为血清或肝素/EDTA 抗凝血浆。本法为速率法,参数见后附附录 A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作,见仪器操作规程。6.计算ΔA/min×Vt×1000 HBDH(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×Fe×Vs×d式中:ΔA/min—— 每分钟吸光度变化率; e —— 18.5 摩尔吸光系数;Vt—— 反应液总体积(ml); d —— 1 比色杯光径(cm );1000—— 变化因数; Vs—— 标本体积(ml);7.操作性能7.1 精密度:批内 CV2.1%,批间 CV3.33%。7.2 准确度:检测结果的相对不准确度≤±10%。7.3 灵敏度:羟丁酸脱氢酶浓度为:200U/L 时,吸光度变化率 ΔA340nm/min 为 0.045~0.055。7.4 可报告范围:血清与试剂用量之比为 1:24 时,测定上限为 400U/L。7.5 特异性:测量值在给定值的 90%-110%范围内。7.6 干扰:内源性干扰物为 Hb1000mg/ml、TG 2000mg/ml、BIL 30mg/ml、VitC 300mg/ml 对测试结果无明显影响。8.参考值74~140U/L 。9.临床意义α-羟丁酸脱氢酶的活性定义为:当用 α-酮丁酸作为底物时所获得的乳酸脱氢酶(LDH)的活性。LDH-1 较其它同工酶对 α-酮丁酸有更大的亲合力,因此当用 α-酮丁酸作为底物时,含 LDH-1 多的组织如血清、心肌、红血球等就具有较高的活性,即 α-HBDH活性高;而肝、骨胳肌等具有较低的活性,即 α-HBDH 活性低。常用 α-HBDH来测量血清中 LDH-1 的活性。α-HBDH 与 LDH、GOT、CK 、CK-MB 一起构成了心肌酶谱。附录 A: 参数
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