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第三章 灭火剂.doc

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第三章 灭火剂、保护剂与免役佐剂第一节灭火剂为了提高生物制品的安全性,防止病原体扩散,很多疫苗都是将抗原灭活后制成的没有毒力和没有感染力的制品。灭活是生物制品中的一项非常基本技术!!!本章主要讲述:一、灭活的概念 二、灭活的类型 三、灭火剂 四、影响灭活效应的因素 五、灭活的检测一、灭活的概念微生物学意义上灭活有两层含义:1、是指破坏或杀死微生物使其成为没有生命物质的过程。2、生物制品上的灭活还有灭能的含义,是指将一些活性物质(微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等)丧失活力的过程。例如:经过 56 度加热 30 分钟处理,可破坏诊断血清和待检血清中的补体活性,从而避免补体对诊断的干扰作用。生物制品意义上灭活的含义:是利用物理或化学的方法,破坏卫生物的生物学活性,破坏病原微生物的繁殖能力和致病能力,但仍然保留反应原性和免疫原性的过程。二 、灭活的类型按照灭活作用的性质可分为两类:物理灭活和化学灭活。其中化学灭活的效果确实、方法简单而且最为常用。灭活原理:使微生物蛋白,核酸,脂质等变性和失去活性,从而起到灭火的作用。1、物理灭活包括加热灭活、紫外线灭活和 r 射线灭活等方法。加热灭活:最早有 smith 等研制猪霍乱灭活菌苗时提出,后来在研制淋球菌苗时,发现热灭火容易使菌体蛋白发生变性,影响免疫原性。目前,除诊断抗原尚采用外,已经基本淘汰。紫外线灭活:效果不够确实,曾经发生过紫外线灭活的强毒重新活化的例子。R 射线灭活:效果尚不十分清楚。2、化学灭活:利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变,从而丧失生命力,感染性,毒性或活性。然而,化学灭活的效能常受灭火剂种类,剂量和作用温度,PH,时间等因素的影响,因此,必须进行筛选最佳的灭活条件。在特定条件下,物理灭活与化学灭活也可以联合用于某些生物制品的灭活。三、灭火剂1 概念:灭火剂又称化学灭火剂,用来灭活生物制剂活性的物质。在 1911 年由Lowenstein 等用甲醛处理破伤风毒素,使毒性丧失而制成类毒素;以后在 1924年 Puntoni 以 0.1%苯酚或 0.1%甲醛处理制成犬瘟热灭活苗,Dorset 等(1934,1936)用结晶紫灭活猪瘟病毒制成猪瘟结晶紫疫苗。在我国,以 1984年版《规程》为例,在 20 种灭活疫苗(包含类毒素)中甲醛灭活的有 17 种,苯酚灭活 1%一种,结晶紫灭活的 2 种。到 80 年代,化学灭火剂的研究发展极快,已筛选出不少优良的灭火剂。2、常用灭火剂:(1)甲醛:是生物制品上最古典、最广泛使用的灭火剂。甲醛的水溶液-福尔马林,含甲醛 36-40%。甲醛的灭活机制是还原作用,低浓度时能破坏微生物的生命链,从而丧失活力而保存活力。 ;高浓度时与微生物蛋白质的氨基结合形成另一种化合物,从而破坏杀死微生物。通常:用于菌苗灭活的浓度为 0.1-0.8%;用于疫苗灭活的为 0.05-0.1%。(2)苯酚:又称石碳酸。有腐蚀性,而且有毒!灭火机制:是微生物蛋白质变性和抑制如脱氨酶、氧化酶等酶系统的活性,从而导致微生物死亡。通常:0.2%浓度的苯酚可抑制一般细菌的生长,要杀死细菌则需要 1%以上浓度的苯酚,另外,芽孢、真菌和病毒对苯酚的耐受性很强。(3)B-丙烯内酯:又名丙内酯。灭活机制:破坏病毒的核酸芯,但不损坏衣壳蛋白,因此保护性抗原成分得以保留,主要用于狂犬病灭活苗的制备。然而研究表明,丙内酯是一种潜在的致癌因子。(4)结晶紫:是甲基紫、龙胆紫的纯品。灭活机制:是结晶紫阳离子与微生物蛋白质带阴性电荷的羧基形成弱电离的化合物,从而干扰微生物正常代谢和氧化还原作用,主要干扰细胞壁粘肽的合成,导致革兰氏阳性菌生长繁殖受阻。(5)硫柳汞:常做消毒剂和杀菌剂用,百日咳菌苗作为灭火剂。(6)烷化剂:是含有烷基的分子中去掉一个氢原子基团的化合物,它能与另一种化合物作用,将烷基引入,形成烷基取代物。作用机制:是烷化微生物 DNA 分子中的鸟嘌呤和腺嘌呤,引起单链断裂、双螺旋链交联及干扰酶系统和核蛋白作用,从而破坏核酸代谢、合成,导致病毒核酸芯破坏而达到灭活目的。烷化剂灭活可使病毒丧失感染力而不损害蛋白壳,得以保留其抗原性。有缩水甘油醛、N-乙酞乙烯亚胺、二乙烯亚胺。缩水甘油醛:50 年代末合成的一种烷化剂,曾用于大肠杆菌噬菌体、新城疫病毒、口蹄疫病毒等灭活,灭活效果优于甲醛。灭活机制:环氧烷基作用于病毒蛋白、核酸而导致丧失毒性。乙酞乙烯亚胺:起烷化作用的功能团是乙烯亚胺基,其灭活效果在病毒要高于细菌。灭活口蹄疫病毒的剂量为 0.05%二乙烯亚胺:是乙烯亚胺的一种衍生物。口蹄疫病毒灭活时。最终浓度为 0.05%四、影响灭火剂灭活的因素所谓灭活效果:一是指灭活的完全性,即被灭活物的活性(毒性)是否能完全丧失或破坏。二是灭活后是否保留良好的抗原性,即灭
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