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疟原虫血片制作及染色.ppt

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疟原虫血片制作及染色.ppt
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疟原虫血片制作与染色,云南省寄生虫病防治所 赵晓涛,电子邮箱:zxt_423@163.com 办公室:疟疾防制科 0879-2141182 手机:18987921109 QQ:35566625,血膜制作 血膜染色 影响染色效果的因素,主要内容,血膜制作(血膜分类),用于检查疟原虫的血涂片有两种:一种是将血液涂呈薄膜状,称薄血膜;一种是血液涂成圆盘状,称厚血膜。厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面,而薄血膜上的血细胞则要求平辅在玻片上面。,门诊或现场发热病人血片,标本片,厚血膜 用血量约为4μl~5μl,涂制成直径0.8 ~ 1cm的厚血膜,由于在制备过程中红细胞已溶解,疟原虫在形态上仍可分辨,但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。受影响较大的有大、裂殖体的形态。 由于厚血膜与薄血膜相比血量大,须查范围小,节省时间,阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的15~25倍。所以,我们推荐疟疾诊断(门诊检验及现场普查)应以检查厚血膜为主。,厚、薄血膜的优缺点及其适用范围,薄血膜 用血量约为1-1.5μl,涂制成2cm宽×2.5cm长面积的薄血膜。由于在制备过程中,血片通常经甲醇固定,使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整,适用于对疟原虫虫种的鉴定。 由于用血量少,为保证检测的敏感性,常耗时较多,不适用于大规模调查。特别在医院的检验室,由于要求在短时间内作出诊断,因而极有可能出现漏诊。,厚、薄血膜的优缺点及其适用范围,血膜制作(取血时间),取血时机 现症病人一般可随时取血,疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时,则应掌握适宜的取血时机。,血膜制作(取血时间),间日疟 前驱期相当于肝内期疟原虫发育,因原虫密度太低, 镜检多为阴性。 发冷(寒战)期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细胞期,镜检多为裂殖体和环状体。 发热期外周血中以环状体(小滋养体)为主,也可见到裂殖 体; 出汗期因原虫密度太低,镜检多为阴性。 发作后数小时,间歇期外周血中以大滋养体为主,形态较易辩认,为诊断的有 利时机; 发作36-48h,可检出裂殖体; 发作1-2次后,配子体出 现较多。,血膜制作(取血时间),恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血,发作后2小时左右,此时环状体发育至最高峰,初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体,是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。,血膜制作(工具准备),一次性采血针、75%酒精、棉棒(球),载玻片,推片,记号笔或铅笔。,血膜制作(取血操作),取血方法 采血部位一般人为耳垂,指头,通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位(冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒),待酒精干后,用左手拇指和食指紧捏耳垂上方,右手持消毒采血针(一人一针,避免血传疾病)迅速刺入耳垂下端1~2毫米,不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向上挤压出血。,厚血膜 用推片的一角,从取血部位刮取约4-5微升血量(相当于火柴头大小),使血滴与平置的载玻片接触,再由里向外一个方向旋转,转2~4圈,再回到圆心收起,涂成直径0.8~1cm大小圆形厚血膜。水平放置,务必使血膜厚薄均匀,过厚易于脱落,过薄达不到检出率的要求。,血膜制作(涂片操作),血膜制作(涂片操作),薄血膜取洁净的载玻片2张,1张以左手拇指,食指夹持载玻片两端(手指切勿接触玻片表面),用另1张边缘平滑(最好为磨口边缘)的载玻片做推片,用推片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血量(相当于1/4火柴头大小),使血滴与平置的载玻片接触,并形成25~30度夹角,待血液向两侧扩展约2cm长度时,均匀而迅速地轻轻向左推出(约2.5cm长)。,,将推玻片向1的方向稍抽回,当血液充满推玻片适当宽度(约2cm)后,以一定均匀的速度向2的方向滑动(约2.5cm)。,,,,,,,,血涂片质量评价:血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、两侧留出空间,注意:血滴大,速度快、角度大 血膜厚血滴小,速度慢、角度小 血膜薄,,,血膜制作(涂片操作),涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分,第1、2格备贴标签及编号用;厚血膜涂在第3格中央,薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个;门诊和发热病人血片每片1人,涂2个厚血膜1个薄血膜,以防血膜脱落而影响检查;疟疾调查时,每张玻片可涂制2~3人血膜。,标本片,发热病人血片,标签,标签,,,,,,,,,,,厚、薄血膜的位置 每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜,如图,,,,,2.5cm,,,,,,各种不同的疟疾血片涂制法:,,标准血片,门诊发热病人血片,居民普查血片,血膜制作(涂片操作),血膜编号 血膜制成后,立即用特种蜡笔或
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