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大规模间充质干细胞培养技术评估报告.pdf

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大规模间充质干细胞培养技术评估报告.pdf
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274 中国医药生物技术 2013 年 8 月第 8 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2013, Vol. 8, No. 4 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.04.007 ·卫生技术评估· 大规模间充质干细胞培养技术评估报告 陈津,郭子宽,王立生,崔春萍,胡泽斌,吴朝晖,吴祖泽 编者按 间充质干细胞是目前成体干细胞治疗技术的主要种子细胞,是继造血干细胞之后临床应用研究最多,也是最成熟的一种成体干细胞,其原始含量很少,必须进行体外大规模扩增培养才能满足临床治疗的需要。因此大规模间充质干细胞培养技术是整个干细胞治疗技术的关键部分。 2012 年,卫生部科技教育司组织了干细胞治疗、介入治疗、微创手术和影像诊断 4 项卫生技术评估工作。中国医药生物技术协会承担了干细胞治疗技术评估工 作,并与军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室共同完成干细胞治疗技术评估的子项目 ——大规模间充质干细胞培养技术。通过本评估报告以期为培养临床级间充质干细胞及制定临床研究管理规定提供相关信息。 【 摘要 】 目的 通过对间充质干细胞体外培养技术的系统评价, 为制定间充质干细胞临床研究的管理规定提供相关信息。 方法 采用文献调研和专家讨论的方式对间充质干细胞的细胞来源、分离方法、培养技术、保存、安全性、质量监控等方面进行评估。 结果 ①来源: 间充质干细胞可以来源于骨髓、 脂肪、 脐带、脐带血、胎盘等众多组织。②分离方法:常用密度梯度分离法、流式分选法和直接培养法,通过其贴壁生长的特性进一步纯化。③培养方式:原始间充质干细胞数量很少,但经过 2 ~ 3 周的体外扩增培养,可以满足临床使用的数量级,间充质干细胞培养体系有开放式平面培养和全封闭式生物反应器培养方式,要求在 GMP 条件下的洁净实验室内进行。④培养基:间充质干细胞培养基主要有含胎牛血清培养基、人 AB 血清或血小板裂解物替代胎牛血清的培养基以及成分确定的无血清培养基,临床使用应尽量避免使用异种血清。⑤细胞冻存:间充质干细胞可以深低温保存而不改变生物学特性, 低温保护剂有二甲基亚砜、 甘油、 羟乙基淀粉等。⑥安全性:体外培养的间充质干细胞在 8 ~ 10 代以内,基因型稳定,应用于临床是安全的。超过 10 代以后,风险增加。 目前尚未发现培养的间充质干细胞与新生肿瘤有直接关系。⑦间充质干细胞质量监控标准包括供体筛选、细胞微生物安全检测(细菌、真菌、支原体) ,细胞功能鉴定(诱导分化、流式鉴定) ,基因组不稳定性或细胞衰老判定等。 结论 间充质干细胞来源广泛,取材方便,其分离和培养技术成熟。可以在体外实现大规模的培养,满足临床使用的数量级,并且可以实现长期保存而不改变生物学特性。间充质干细胞体外培养技术还缺乏相应的标准规范,更适用于临 床的无血清培养基和冻存保护剂还有待于进一步的研究与 论证。 【 关键词 】 间质干细胞; 培养技术; 技术评估,生物医学 20 世纪 70 年代,人们发现了一种来源于中胚层、成纤维样贴壁生长的细胞,后来确定为间充质干细胞( mesenchymal stem cells, MSC)[1-2]。MSC 是一群具有高度自我更新能力和分化潜能的成体干细胞。因其具有免疫调控、分泌细胞因子、取材方便等优点而倍受关注,成为细胞治疗的理想种子细胞[3]。间充质干细胞研究日益受到广泛关注并显示出越来越广阔的应用前景,在细胞治疗、组织工程等领域具有极为重要的应用价值,是继造血干细胞之后临床应用研究最多,也是最成熟的一种成体干细胞。 1995 年首次报道 MSC 应用于临床实验,现在培养的 MSC 已被广泛地用于临床实验研究,如移植物抗宿主病( GVHD) 、充血性心力衰竭、急性心肌梗死、 2 型糖尿病、脊髓损伤、软骨和骨损伤、克罗恩病等,而且在肾脏、肌肉和肺的损伤修复中也有初步进展[3]。虽然成体干细胞在许多疾病的临床研究中表现出令人振奋的疗效,但迄今为止,除了造血干细胞用于治疗血液系统恶性肿瘤外,尚未 基金项目: 卫生部科技教育司 2012 年医疗高新技术评估项目 作者单位: 350025 福州,南京军区福州总医院(陈津) ; 100850 北京,军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室(陈津、郭子宽、王立生、崔春萍、吴祖泽) ; 100022 北京,中国医药生物技术协会(胡泽斌、吴朝晖) 通讯作者: 王立生, Email: lishengwang@ymail.com 中国医药生物技术 2013 年 8 月第 8 卷第 4 期 Chin Med Biotechnol, August 2013, V
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