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糖尿病大鼠造模过程.doc

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糖尿病大鼠造模过程.doc
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1 材料与方法1. 1 实验动物SPF级SD雄性大鼠39只, 10周龄, 体重180~200 g。1. 2 试剂与高脂饲料配方STZ购自Sigama 公司, 胆固醇、胆酸钠由上海蓝季科技发展有限公司提供。高脂饲料配方: 2%胆固醇, 0. 3%三号胆盐,20%蔗糖, 10%猪油, 67. 7%基础饲料。1. 3 动物分组与饲养SPF级雄性3周龄SD大鼠39只, 体重180g~200g, 适应性饲养一周后, 随机分为正常对照组10只, 模型组34只。模型组大鼠禁食12h后, 单次腹腔注射35mg /kg的STZ。STZ用灭菌的0. 1mmo l/L, pH4. 4d的柠檬酸- 柠檬酸钠缓冲液配成2%溶液, 现配现用。正常组只注射等量的缓冲液。72h后取尾静脉血测空腹血糖高于7. 0mmo l/L 和餐后血糖均高于11. 1mmo l/L为糖尿病模型建立。一次注射未成模, 立即仍按原剂量补注一次STZ, 未成者淘汰,成模但缓解者淘汰。糖尿病大鼠成模后给予要付治疗,分别是药物A+多糖 1组(25ug/ml/天,灌胃给药)10只;药物B+多糖1组(25ug/ml/ 天,灌胃给药)5只;药物C+多糖 1组(25ug/ml/ 天,灌胃给药)5只;药物A+多糖2组(25ug/ml/天,随饮水给药) 5只;药物B+ 多糖2组(25ug/ml/ 天,随饮水给药)5只;药物C+多糖2组(25ug/ml/天,随饮水给药)5只;正常对照组(5只),多糖组和二甲双胍组给予每天灌胃,七叶皂甙钠组给予腹腔注射。除正常对照组外其他SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养。1. 4 标本采集4周后,除取材组外,其他大鼠进行尾静脉取血,约300微升,30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。并且对糖尿病模型组3只,正常对照组1只进行取材(肾脏、胰腺、血管和心脏),动物称重后,分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉(1ml/kg),腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。其他组织分为两部分,一部分组织于-80°C冻存,另一部分组织生理盐水清洗后,用4% 多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化,并进行 光镜观察。8周后正常对照组2只,糖尿病模型组3只进行尾静脉取血,约300微升,30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。其余大鼠进行取材(肾脏、胰腺、血管和心脏),称重后,分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉(1ml/kg ),腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清, 用于备检胰岛素含量。其他组织分为两部分,一部分组织于-80°C冻存,另一部分组织生理盐水清洗后,用4% 多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋 , 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化,并进行光镜观察。12周后对正常对照组2只和糖尿病模型组3只进行取材,称重后,分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉(1ml/kg),腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清, 用于备检胰岛素含量。其他组织分为两部分,一部分组织于-80°C冻存,另一部分组织生理盐水清洗后,用4%多聚甲醛固定固定24h, 常规脱水包埋, 连续切片4μm, 切片固定于载玻片上, HE染色,免疫组化,并进行 光镜观察。实验结束时将各组动物处死。
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