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医学微生物学 第19章 支原体.ppt

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医学微生物学 第19章 支原体.ppt
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支原体 Mycoplasma 南华大学医学院 吴移谋 教授 第 19章 第一节 概述 定义 – 缺乏细胞壁 – 形态上呈高度多形性 – 能通过除菌滤器 – 在无生命培养基中能生长繁殖 – 最小 的 原核细胞型微生物 – 能形成有 分支的长丝 , 故称支原体 柔膜体纲 支原体目 肺炎支原体 , 人型支原体 , 生殖支原体 ,穿透支原体 , 发酵支原体 , 梨支原体 脲脲原体 支原体分类 支原体科 无胆甾原体科 螺原体科 支原体属 脲原体属 一、生物学性状 ( 一 ) 形态 0.3~ 0.5 μm 无细胞壁 高度多形性 : 球 、 杆 、 丝状和分枝状等 一般 Giemsa染色较 好 , 染为淡紫色 ( 二 ) 结构 内外两层为蛋白质及糖类 , 中层为脂类 ( 磷脂为主 ) , 凡作用于胆固醇的物质 , 如皂素 、 毛地黄甙 、 二性霉素 B等均能破坏细胞膜致其死亡 。 特殊的顶端结构 : 粘附宿主上皮 细胞表面 , 与支原 体的致病有关 。 ( 三 ) 培养特性 营养丰富的培养基 : 10%~ 20%人或动物血清以提供胆固醇与其 它长链脂肪酸 , 多数还需添加酵母浸液 、 组 织浸液 、 核酸提取物和辅酶 。 pH: 适宜 7.6~ 8.0( 7.0易死亡 ) , 但解脲脲 原体最适 pH5.5~ 6.5 兼性厌氧 : 大多寄生性支原体在 37℃ 时在微氧环境 ( 含 5%CO2和 90%N2) 中生长最佳 。 繁殖方式多样 : 二分裂繁殖外 , 还有分节 、 断裂 、 出芽或分枝等方式 固体培养基: 2~ 7天 长出直径约 10~ 600 μm的典型的“ 荷包蛋样 ” 菌落 : 低倍镜下 见 菌落呈圆形 ,心致密隆起 , 深入琼脂 , 外周由颗粒包绕 。 液体培养基: 清亮 , 用颜色变化 单位 ( CCU) 表示 。 需用放大镜 /低倍显微镜观察 支原体典型菌落 鉴别点 支原体 细菌 L型 细胞壁缺失原因 在遗传上与细菌无关 与原菌相关,可以回复细胞膜 含高浓度固醇 细胞膜不含固醇 培养特性 需要胆固醇 大多需要高渗培养 菌落大小 生长慢,菌落小 菌落稍大 ( 0.6~1.0) 液体培养 液体培养混浊度极低 有一定混浊度,可附壁 支原体与细菌 L型的异同点  不同点 −缺乏细胞壁 , 形态多样 , 能通过滤菌器 。 −固体培养 — 菌落呈荷包蛋样或颗粒状 。 −临床表现相似 — 间质性肺炎 、 泌尿生殖道感染 、 不育等  相同点 支原体 葡萄糖 精氨酸 尿素 吸附细胞 致病性 肺炎支原体 + — — 红细胞 肺炎、支气管炎 人型支原体 — + — — 泌尿生殖道感染 生殖器支原体 + — — — 泌尿生殖道感染 穿透支原体 + + — 红细胞 条件感染 CD4+T细胞 多见于艾滋病 巨噬细胞 溶脲脲原体 — — + — 泌尿生殖道感染 流产及不孕不育 生化反应 ( 四 ) 抗原结构 ♣补体结合试验可检测糖脂类抗原 ♣ELISA试验可检测蛋白质类抗原 ♣血清抗体可用生长抑制试验 ( growth inhibition test, GIT) 和代谢抑制试验 ( metabolic inhibition test, MIT) 以 鉴定 ( 五 ) 抵抗力 ♣对化学消毒剂敏感 , 对结晶紫 、 醋酸铊 、 亚碲酸钾有抵抗力 ; ♣对影响细胞壁合成的抗生素如青 霉素类天然耐受 , 但对干扰蛋白 质合成的抗生素如强力霉素 、 交 沙霉素等敏感 。 二、致病性与免疫性 (一) 致病机制 ♣荚膜或微荚膜:抗吞噬作用 ♣毒性代谢产物:神经毒素 、 磷脂酶 C、核酸酶 、 过氧化氢和超氧离离子均能引起宿主黏膜上皮细胞或红细胞的病理损伤 ♣超抗原:免疫调节 ♣其它:如穿透支原体 粘附 侵入 CD4+ T细胞引起损伤 ♣粘附素:粘附呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞 ( 二 ) 所致疾病 ♣存在广泛 , 多不致病 ♣肺炎支原体引起原发性非典型性肺炎 ♣溶脲脲原体 、 人型支原体和生殖支原 体可引起泌尿生殖系统感染和不育症 ♣穿透支原体和发酵支原体为艾滋病的 辅助致病因素 二、致病性与免疫性 ( 三 ) 免疫性 ♣体液免疫:抗膜蛋白的抗体包括 IgM、 IgG和 SIgA ♣细胞免疫 : 主要是特异性 CD4+ Th1 细胞分泌细胞因子 二、致病性与免疫性 – 0.2~ 0.3μm, 高度多形性 , 如球形 、 球杆状 、 棒状 、 分枝状和丝状 ; – 初次分离应 在 含血清和新鲜酵母浸出液的培养基中 , 一般 10天 左右长出菌落 ; 多次传代后生长加快 , 菌落呈 “ 油煎蛋 ” 状 ; – 能发酵葡萄糖 , 不能利用精氨酸与尿素 ; – 对美蓝 、 醋酸铊 、 青霉素不敏感 。 第二节 肺炎支原体 一、生物学性状 ( 一 ) 致病性 1.主要经飞沫传播 , 但 大多数发生于夏 末秋初 , 5~ 15岁青少年发病率最高 。 2.含特殊的顶端结构 : P1表面蛋白 ( 170 kDa) 和 P30( 32 kDa) 为主要的 粘附 蛋白 , 使肺炎支原体黏附于呼吸道上皮 。 3.肺炎支原体具有超抗原作用 , 能刺激炎症细胞在感染部位释放大量的淋巴因子 ( 如TNF-α 、 IL-1、 IL-6) 引起组织损伤 。 二 、致病性与免疫性 ( 二 ) 所致疾病 原发性非典型性肺炎 ( primary atypical pneumonia) , 临床以咳嗽 、发热 、 头痛 、 咽痛和肌肉痛为主 , 有时并发支气管肺炎 、 皮疹 、 心血管和神经系统症状 。 二 、致病性与免疫性 ( 三 ) 免疫性 血清特异性 IgM、 IgG及 SIgA和致敏的淋巴细胞 ; 呼吸道局部 黏膜 产生的 SIgA对防止再感染有较强保护作用 ; 出现 IgE介导的 I型超敏反应 , 促使哮喘病急性发作 ( 一 ) 分离培养 痰或咽拭子接种在 SP-4培养基 , 挑选可疑菌落 , 经形态 学 、 糖发酵 、 溶血性 、 血细胞吸附试验进行初步鉴定 , 进一步鉴定需用特异性抗血清做 GIT与 MIT实验 。 三 、微生物学检查法 三 、微生物学检查法 ( 二 ) 血清学检查 冷凝集试验 : 即用病人血清与人 O型血 红细胞 或自身 红细胞 混合 , 4℃ 过夜时可发生凝集 ,而在 37℃ 时 这种 凝集又分散 解离 开 , 但仅 50% 左右 的 患者 才 出现 阳性 。 此反应为非特异性 。 快速诊断 ELISA: 检测 P1和 P30蛋白 mAbs PCR: 从 痰标本 中 检测 16S rRNA或 P1蛋白基因 防治原则 大环内酯类药物 喹诺酮类药物 四 、防治原则 第三节 解脲脲原体 形态 : 0.5~ 0.3 μm, 单个或成双排列 固体培养 : 48 h后长出直径 15~ 30 μm “ 油煎蛋 ” 状菌落 。 最适 pH为 5.5~ 6.5。 生化反应 : 分解尿素 , 不分解糖类和精氨酸 抵抗力 : 对 1:2000醋酸铊不敏感 抗原 : MB抗原是其主要膜抗原 , 将解脲脲原 体分为 A、 B两大群 , 14个血清型 一、生物学性状 ( 一 ) 致病机制 -粘附 于宿主细胞表面 , 引起细胞膜损伤; -产生毒性代谢产物如 NH3, 对宿主细胞有 急性毒性作用; -磷脂酶损伤宿主的细胞膜 。 二 、致病性与免疫性 二 、致病性与免疫性 ( 二 ) 所致疾病 非淋菌性尿道炎 、 前列腺炎 、 附睾炎等泌尿生殖道疾病 , 还与自然流产 、早产 、 死胎 和男性不孕 有关 。 病原体检测 接种液体培养基 , 分解尿素产碱 , 酚红指示剂由橘黄色变为红色 ; 再取0.2 ml培养物转种于固体培养基 , 在 5 % CO2 和90%N2的环境中经 37℃ 培养 24~ 48 h, 用低倍镜观察菌落 , 进一步鉴定需用特异抗血清做 GIT与 MIT。 三 、微生物学检查法 核酸检测 PCR检测: 检测尿素酶基因 、 多带抗原 ( MB-Ag)基因和 16S rRNA基因 。 此法快速 、 特异 ,适宜于大批量标本检测 。 三 、微生物学检查法 加强宣传教育 , 注意性卫生 ,切断传播途径 。 四环素类 、 喹诺酮类药物治疗 ,但有耐药株产生 。 四 、防治原则 第四节 人型支原体 -分解精氨酸 , 不分解尿素和葡萄糖 。 最适pH7.2~ 7.4。 固体培养基上形成 200~ 300 μm的较大菌落 , 呈典型的 “ 油煎蛋 ” 状 。 -寄居于泌尿生殖道 , 通过性接触传播 , 可引起附睾炎 、 盆腔炎 、 产褥热等 。 -微生物学检测和防治原则 同 解脲脲原体 。 人型支 原 体 对大 环 内 酯类 抗 生素 不 敏感 , 对1:2000醋酸铊与红霉素 ( 100 mg/L) 不敏感 。 第五节 生殖支原体 -生殖支原体基本形态为烧瓶状 , 能发酵葡萄糖使培养基变酸 , 不分解尿素和精氨酸 。 -培养基 上 不生长 , 须在 无 醋酸铊 SP-4培养基生长但缓慢 , 菌落呈典型的 “ 油煎蛋 ” 状 。 -顶端结构有 粘附 素 MgPa, 140 kDa, 与肺炎支原 , 能 粘附 在人泌尿生殖道上皮 , 主要引起尿道炎 。 -较难培养 , 生长慢 , 不适宜于常规实验室分离培养 。 实验室最好的诊断方法是核酸检测 。
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