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实验室基本操作培训.ppt

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实验基础知识/基本技能培训,谨记实验室规程认识实验的主要仪器设备掌握实验仪器设备基本技能,实验目的,实验规程,严格遵守制定的实验室安全规则。 发现实验室/楼内任何地方有危害安全之人、事、物等,必须立即向有关人员反映并作紧急处理。 1) 穿着规定 必须按规定穿戴工作服。 进行危害物质、挥发性有机溶剂、特定化学物质等化学药品操作实验,必须要穿戴防护具(防护口罩、防护手套、防护眼镜)。 长发及松散衣服妥善固定。,2) 饮食规定 禁止在实验室吃喝食物且使用化学药品后需先洗净双手方能进食。严禁在实验室内吃口香糖。 禁止使用实验室仪器冷藏/加热食物。,3) 药品操作相关规定: 操作危险性药品请务必遵守操作守则操作流程进行实验,勿自行更换实验流程。 识记清楚药品危害性,避免危害发生。,4) 用电安全相关规定: 按照规定(电压、功率)合理用电。 手上有水或潮湿请勿接触电器用品或电器设备。 掌握主要仪器、设备的性能和操作方法,严格按操作规程操作。最后离开实验室务必随手将不用的水、电等开关关闭。,如:擦拭、维修过程中要关闭电源,5) 环境卫生相关规定: 注重环境卫生,并须保持整洁。 化学物溢满地面或工作台时应立即选用合适的方法擦拭冲洗干净。 严格区分开污染区和洁净区。,污染区:戴手套操作。 洁净区:徒手操作。,1)详细记录和分析实验结果,并按时提交实验报告; 2)实验中一定要处处用心、勤动手,多问为什么; 3)仔细操作和观察; 4)保留好每一步的实验样品,在确准的情况下才能当废液扔掉。,实验要求,洗净后的玻璃仪器倒置时器壁应不挂水珠,然后用少量蒸馏水或去离子水分多次(最少三次)涮洗。 玻璃仪器洗涤时要注意在使用各种性质不同的洗液时,一定要把上一种洗液除去后再使用另一种洗液,以免相互影响。 量取标准物质或样品的玻璃仪器不能采用高温烘干,应倒置凉干。,仪器使用方法及注意事项,玻璃仪器,容量瓶塞子应配套;使用前,应检查容量瓶瓶塞是否密合;不要用容量瓶长期存放配好的溶液容量瓶长期不用时,应该洗净,把塞子用纸垫上,以防时间久后,塞子打不开;容量瓶一般不要在烘箱中烘烤,如需使用干燥的容量瓶,可用电吹风机吹干。,容量瓶,环境温控:大部分的分子生物学实验都要求在一定的温度下进行操作,为了保持这些条件,实验室应装备空调等。 药品、试剂、样品等的保存:不同药品、试剂、样品要求在不同的温度下保存,实验室必须备有4℃、-20℃、-80℃的冰柜/箱,需要在更低温度下保存的样品,则须使用液氮罐。,温度控制系统,低温操作可以用制冰机制冰块降温;对于需在较高温度下进行的操作,则可使用烘箱、微波炉、恒温水浴锅、恒温空气摇床等。,冰箱/柜的使用:门(随手关,关严)电源(防止不小心关闭) 微波炉:要用微波炉专用容器(不能加热金属、密封物); 不要让微波炉空转;微波炉工作时不要将眼睛紧靠微波炉5厘米之内去观看微波炉工作-眼睛对微波最敏感,以免受到不必要的伤害;防灼伤!不要徒手拿容器、不要把容器口冲着人!,制冰机的使用:(水-进水、排水;电) 1.不论何种原因停机时,不得连续启动,要每隔5分钟再启动,以免损坏压缩机! 2.定时检查进、出水管接头,以便处理可能泄露的少量余水! 3.不用时,应排掉内胆内余水,用干净的布擦干储冰箱内胆!,4.在对制冰机进行清洁、检查及一周以上不用时,请拔掉电源插头。,液氮罐(液氮生物容器 )的使用: 液氮是一种超低温液体(-196℃),如溅到皮肤上会引起类似烧伤一样的冻伤,在灌充和取出液氮时应特别注意。 液氮罐主要结构:内胆、真空夹层(容器真空封口接头)、外壳、颈管、专用罐盖。 注意:1、液氮罐只用于盛装液氮,不允许盛装其他液体;2、严防冲击和碰撞;3、操作及取放冷冻物品时,请注意要轻拿轻放;4、长期贮存时,需要定期补充液氮。,保持容器夹层真空的关键部件,用户不得擅自打开容器真空封口接头,烘箱的使用: 是利用电热丝隔层加热使物体干燥的设备。 适用于比室温度高5~300℃(有的高200℃)范围的烘培、干燥、热处理等,灵敏度通常为±1℃。 基本结构一般由箱体、电热系统和自动控温系统三部分组成。 注意:1、每次使用前要根据烘干物品要求确定合适的温度;2、物品不能排列太密,以免影响热气流动、散热;3、保证鼓风机正常运转;4、需要观察工作室内样品情况时,可透过玻璃门观察。但箱门以少开为好,以免影响恒温。特别是200℃以上时,开箱门可能使玻璃门骤冷而破裂。,不允许整夜使用!,恒温水浴锅、恒温空气摇床:根据需要设置温度;恒温水浴锅中要保持足够的水量。,2) 实验用水处理系统,去离子水:指除去了呈离子形式杂质后的纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法,应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子,但水中仍然存在可溶性的有机物。超纯水:既将水中的导电介质几乎完全去除,又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。超纯水中除了水分子(H20)外,几乎没有什么杂质。, 各种用水,在贮存中都会被污染: 塑料容器会产生有紫外吸收的有机物; 玻璃和金属容器会产生金属离子的污染; 长时间放置更会使水长菌,空气中CO2会溶入水中。 所以贮存一定要隔绝空气,密封盖严,必要时贮存在冰箱的冷藏室中;最好使用“新鲜的水”。,3) 消毒系统,常用的灭菌方法:高温、高压灭菌、紫外线照射、火焰焚烧、过滤除菌、酒精等试剂浸泡消毒等,因此实验室必须配备各种无菌处理设备。常用的灭菌仪器设备:高压灭菌锅、紫外灯、酒精灯、滤膜等。,高压灭菌锅 在主体腔内加入适量的清水,将灭菌物品放入灭菌器内; 盖好(注意密封胶圈)顶盖后必须拧紧顶盖; 打开灭菌器的热源,开启排气阀排完空气后(约在水沸腾后10 min~15 min )关闭排气阀; 将压力升至102.9 kPa(1.05 kg/㎡),温度要求达121℃,维持到规定时间(根据物品性质以及有关情况确定,一般20 min~30 min); 灭菌结束后,要待压力恢复到零位后开盖取物。 对液体进行灭菌,容器不能密封、体积不能超过容积的2/3;灭菌结束后不能打开排气阀(尤其是上排气阀)。,4) 计量系统-质量,电子天平对环境高度敏感的精密电子测量仪器, 使用时应小心操作, 台面应无明显振动, 不要放在空调口。天平在使用前,一般都应进行校准操作。轻按CAL显示器出现CAL-100,闪烁,此时,把100g校准砝码放上称盘,显示器出现--等待状态,经几秒名钟后显示器出现100.0000g,拿去校准砝码,显示器应出现0.0000g,如若显示不为零,则再清零,再重复以上校准操作(注意,为了得到准确的校准结果最好反复以上校准操作二次)。,注意:使用精密电子天平前最好热机15~20分钟,以确保正确读取电子天平的数值。称量物品前先按(归零)键;称样时关上天平小门。称物品时,勿超过精密电子天平的最大称量,且需将物品放于称盘中心,需轻拿轻放,不要冲击称盘。严禁有腐蚀性的称物直接接触称盘与天平面板。使用完毕后,要清理称盘、面板,保持仪器清洁。,1、开机预热半小时,检查甘汞电极是否有氯化钾晶体。如果是复合电极,必须预先经过浸泡、活化,才能使用。 2、先用PH试纸大致测定溶液的酸度。根据室温下的数据,进行二点定位。标准溶液一般只能使用一个月。 3、测定溶液的温度,进行温度补偿。 4、待测溶液搅拌30秒,停止搅拌,待稳定后读数。 5、电极使用完以后,甘汞电极要套上胶帽,玻璃电极要浸泡在纯水中。复合电极要在湿润的条件下保存。,PH计,使用时应先用欲滴定溶液润洗2-3次; 注入溶液或放出溶液后,需等待30s-1min后才能读数(使附着在内壁上的溶液留下); 滴定管应用拇指和食指拿住滴定管的上端(无刻度处)使管身保持垂直后读数; 对于无色溶液或浅色溶液,应读弯月面下缘实线的最低点(视线应与弯月面下缘实线的最低点相切); 滴定时,最好每次都从0.00mL开始,或从接近零的任一刻度开始,这样可固定在某一段体积范围内滴定,减少测量误差。读数必须准确到0.01mL。 旋塞要保护润滑,适量使用凡士林,外套胶管固定,防止漏液。,滴定管的使用,移液管的使用,使用时应先用欲取溶液润洗2-3次; 吸取溶液至刻度以上,立即用右手的食指按住管口,将移液管向上提升离开液面,管的末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上,管身保持直立,略微放松食指,使管内溶液慢慢从下口流出,直至溶液的弯月面底部与标线相切为止,立即用食指压紧管口。将尖端的液滴靠壁去掉,移出移液管,插入盛接溶液的器皿中; 盛接溶液的器皿如是锥形瓶,应使锥形瓶倾斜成约30°,移液管直立,管下端紧靠锥形瓶内壁,放开食指,让溶液沿瓶壁留下,流完后管尖端接触瓶内壁约15s后,再将移液管移去。 移液操作前,手指的湿润要合适。 尖头有破损的移液管应报废不再使用。,移液器使用方法及注意事项:,1.设定移液体积 从小量程调节至大量程时,逆时针旋转刻度;应先调至超过设定体积刻度,再回调至设定体积,这样可以保证移液器的精确度。2.装配移液枪头将移液枪垂直插入吸头,左右旋转半圈,上紧即可。忌用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的,长期这样操作会导致移液器的零件因撞击而松散。,3.吸液及放液 垂直吸液:吸液前排空气体,吸头尖端浸入液面3mm以下慢吸慢放; 放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。 绝不允许突然松开,以防溶液吸入过快而冲入移液器内腐蚀柱塞。 4.吸有液体的移液枪不应平放,枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。 5.移液枪在每次实验后应将刻度调至最大,让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命。,6.切忌吸液时突然松开;吸有液体的移液枪平放;所设量程不在移液器量程范围内(会卡住机械装置,损坏了移液器);严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体(如浓酸、浓碱、有机物等);使用完没有将刻度调至最大量程。,低速离心机:最大转速6000 rpm左右,通常不带冷冻系统。 超速离心机:大于30×10 000 r/min,有驱动和速度控制系统,温度控制系统,真空系统(减少摩擦)。 高速(冷冻)离心机:最大转速为20 000-25 000rpm(r/min),一般都有制冷系统,以消除高速旋转转头与空气之间摩擦而产生的热量,转速、温度和时间都可以严格准确地控制,并有数字显示。,5) 离心设备,离心管主要用塑料和不锈钢制成:塑料离心管常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)等,其中PP管性能较好。 塑料离心管都有管盖,离心前管盖必须盖严,倒置不漏液。管盖有三种作用:①防止样品外泄。②防止样品挥发。③支持离心管,防止离心管变形。,离心管,离心设备-使用注意事项,1.离心机应放置在稳定的台面上,以防离心机滑动或振动,出现事故; 2.离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物、转头安装是否紧固。 3.样品的装载和平衡:使用离心机时,必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物;当转头只是部分装载时,管子必须互相对称(保证平衡)地放在转头中,以便使负载均匀地分布在转头的周围,4.低温离心时,转头及离心机要预冷后再使用。5.装载溶液时,要根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管,液体不得装得过多,以防离心时甩出,造成转头不平衡、生锈或被腐蚀。6.开始离心后请不要立即走开,需等待离心机达到设定转速后再离开,注意观察期间是否有声音异常;发现声音不正常时,要停机检查,排除故障(如离心管不对称、质量不等、离心机位置不水平或螺帽松动等)后再工作。,7.冷冻离心结束后,关掉电源,敞开离心机盖子,擦拭离心机内壁,防止凝结的水气化成水引起生锈。8.离心中有液体溅出,需立刻清理,防止腐蚀和生锈。9.离心时不准搬动离心机、不准开盖,不准用手停止转头。10.每次停机后再开机的时间间隔不得少于5分钟,以免压缩机堵转而损坏。11、每次离心完成后,将转子取出,否则长时间放在轴上,可能锈死。,PCR仪,PCR是指聚合酶链式反应。其反应是用DNA聚合酶在体外大量扩增DNA片段的一种方法。 反应历程:变性-退火-延伸 参与反应的物质主要为:引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。,电泳装置,电泳是生化实验中最常用最重要的实验技术之一,主要用于分析、鉴定,也可用于制备。电泳装置由电泳仪和电泳槽两部分组成。 电泳仪:电泳时提供一定的电压和电流电泳槽:凝胶电泳系统的核心部分,根据电泳的原理,凝胶都是放在两个缓冲腔之间,电场通过凝胶连接两个缓冲腔。电泳槽又分为水平电泳槽和垂直电泳槽。,凝胶成像系统,结构组成:全敞开式不漏光暗箱,防泄露紫外凝胶观察窗,自动升降折叠式白光平台及样品平台。全自动软件控制光源选择、滤光片选择、镜头马达驱动变焦/聚焦以及图像捕获 使用注意:开机顺序,先开凝胶成像系统,再开电脑控制软件。凝胶成像系统的门、电脑不能用污染的手套接触。照相后把废胶取出,并用较软的纸擦拭干净。,通风柜:用于有害和有毒气体的操作。 组织打碎机和匀浆器:用于各种生物材料、动植物组织和细胞的破碎。(研钵) 超声清洗机:用于各种器皿、移液管和自动取液器吸头的清洗和高效液相色谱仪所用流动相的脱气等。 冰冻干燥机:用于生物大分子水溶液的冰冻干燥,可由其水溶液直接制得固体干粉。 真空泵:用于旋转蒸发器和各种真空抽气操作。 冷室: 4℃-10℃的冷室,工作人员可以在其中进行各种柱层析、各种电泳、生物大分子的提取和分离、透析等操作,并可以贮存各种生物制品和生化试剂。 暗室:主要用于一些避光的实验,如显影。,分光光度计的使用,1、准备:仪器预热30分钟以上。 检查比色皿是否清洁、完好。 调好仪器的波长、满度、零点。 2、测定每只比色皿的杯差,并作好记录。 3、比色:液体不能倒入太满,三分之二即可。 手拿比色皿的毛面,不能接触光面。关门和操作杆拉动要轻、缓,动作不要太猛。 4、不要用劣质纸擦拭比色皿。比色皿用守后及时清洗或浸泡。,原子吸收仪的使用,1、开机,装上待测元素的阴极灯,预热。 2、检查气路密封性,废液管水封情况。 3、点火检查火焰情况,狭缝是否有锯齿,否则需要清洗。 4、检查纯水的空白,基线是否稳定。 5、根据待测元素的要求,选择分析条件。(富焰还是贫焰,调整灯电流。) 6、根据干扰情况,选择是否需要扣背景, (基本匹配、氘灯扣背景、塞曼效应) 7、制作标准曲线,相关系数必须要0.999以上。曲线做完后要及时分析样品,长时间分析要进行曲线较准。,
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