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安捷伦高效液相色谱仪操作说明.doc

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安捷伦高效液相色谱仪操作说明.doc
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远兴生物能源有限公司1安捷伦高效液相色谱仪操作说明一、校枪及样品处理1. 校枪仪器:两个小烧杯、分析天平、移液枪 1000μL、100μL步骤:打开分析天平预热,一只烧杯放到称量盘上调零,一只装入纯水。将移液枪1000μL、100μL 调至 950μL、50μL,分别吸取纯水称质量,如偏大或偏小,调节移液枪直至准确到 0.001g。 (如枪使用过久或气密性不好,可以准备一个小烧杯装入纯水,每次先轻轻沾湿枪口,甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水,再插上枪头使用。 )注意慢吸慢放,不要挂珠。2. 样品处理:用 1.5mL 离心管取 0.5mL 发酵液,取出样品后,首现在离心机上离心(13000rap/min 3min) 。然后将样品稀释 20 倍,取 950μL 纯水、50μL 发酵液于离心管中。混匀后在离心机上离心(13000rap/min 3min) 。准备自动进样瓶(瓶中放上内衬管) ,取 200μL 待测液盖紧盖子。按顺序放到自动进样盘中。二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、 泵 :四元、进样器:自动进样器(六通阀) 、柱温箱、检测器:示差折光检测器开关打开。打开计算机,进入 Windows XP 画面,并运行 CAC Server 程序,打开色谱仪各组件电源,待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后,双击 Instrument 1 Online ,图标打开工作站。化学工作站自动与 1200LC 通讯。流动相:将流动相(一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相)放入溶剂瓶中,打开冲洗阀,设流速为 2ml/min,单击确定 ,再依次单击泵 →控制,选中启动,单击确定,则系统开始冲洗,至管路无气泡为止,切换管路反复操作至所需管路均无气泡。在“控制”选项中选“关闭” ,关闭泵,关闭冲洗阀。单击泵下面瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。每次四元泵开始前,要打开冲洗阀阀门以 5ml/min 的流速冲洗 10 分钟,使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出,以免隔夜的流动相损伤色谱柱。每次进样检测前,要用流动相冲洗色谱柱 30 分钟,达到柱温前 20min 流速设为0.2ml/min,达柱温后再改为 0.6ml/min。待 1—1.5h 检测器的基线稳定方可进行进样检测;检测结束后,色谱柱要先用水冲洗 20 分钟,然后用甲醇或乙腈冲洗至少 20 分钟,以延长色谱柱的使用寿命。绝对禁止偏酸、偏碱的流动相以及缓冲液在色谱柱中过夜。三、编辑分析方法新方法建立:程序菜单显示绿色,即可进行参数设置及操作泵参数设定:设定流速、比例、运行时间、平衡时间、泵辅助设定(梯度)等。点击确定进入下一画面自动进样器参数设定:设定进样量(5μL ) 、抽取位置(调节针高度 3.0mm) 、进样方式等。“序列”→序列参数→子目录(日期:年月日时间)“序列表”:插入/批量输入向导→ “追加” 、 “插入”→ “样品位置” 、 “开始位置”、 “增量” 、 “插入行数”标准进样:只能输入进样体积,此方式无洗针功能。抽取位置:3.0mm远兴生物能源有限公司2洗针进样:可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。柱温箱参数设定:测定时 75℃,反冲时 80℃。 (在” 温度” 下面的方框内输入所需温度, 并选中它, 点击 ”更多”键,选中“与左侧相同”使柱温箱的温度左右一致,点击“确定”进入下一界面。检测器参数设定-示差参比池冲洗:10min(校零) 。不需要每次都冲洗。温度设置 50℃(不要设很高,与检测器温度相当即可)选中点击确定进入下一画面方法保存单击方法另存为 输入一—方法名,如 test 单击确认选择已有方法:点击【Method】 ,点击【Load method】选项,选取已存的各种操作方法。 四、样品分析与采集数据将样品放于样品盘中相应位置,所有的样品均需澄清。“序列”→“序列参数”:按照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数(样品瓶位置、名称、方法) 。待仪器显示 Ready,基线平稳,从【Run control】菜单中选择【Run Method】 ,开始进样分析。或点击“开始”开始进样分析。数据处理:单击【View】菜单,单击【Data analysis】选项,进行数据分析。单击 【View 】菜单,单击【Method and Run control】选项,回到样品分析界面。数据分析方法编辑从 File 菜单选择 Load signal 选中您的数据文件名,单击 Ok积分:从“积分” 中选择“积分”, 如积分结果不理想,再从菜单中选择“积分事件” 选项选择合适的斜率灵敏度 、峰宽 、最小峰面积、 最小峰高从积分菜单中选择积分 选项则数据被积分如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止单击左边图标将积分参数存入方法五、标准曲线的绘制1.称取葡萄
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