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QIAGEN外泌体提取快速操作规程.pdf

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QIAGEN外泌体提取快速操作规程 Part I: 囊泡分离 开始前提示  本操作规程用于从0.1至1 ml血清或血浆中纯化外泌体或其他细胞外囊泡。本规程从细胞外囊泡分离总RNA(包括小RNA)(Part II)。  如有必要,加热重溶RWT缓冲液中的所有组分。  除了分离步骤(步骤 11)之外,其他操作应该在室温(15-25°C)快速进行。  RWT缓冲液和RPE缓冲液原液中在使用前应加入96-100%的乙醇(添加体积见瓶签)。  miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control (cat.no.219610) 必须单独完成。如何准备工作液的建议见exo RNeasy Serum/Plasma手册。  规程中RNA纯化部分(步骤7之后)与QIAGEN MaXtract High Density Tubes(cat.no.129056)一致。 1. 建议只用预过滤的血浆,不包含大于0.8的颗粒。或者于4°C以16,000 g将样品离心10分钟。 2. 加1份体积XBP缓冲液至1份体积样品中。轻轻颠倒离心管5次立即混匀,将混合液置于室温。 3. 样品/XBP缓冲液的混合液加至exoEasy离心柱上并以500 g离心1分钟。弃去流穿液并将离心柱置于相同的收集管中。 提示:如果有液体残留在膜上,以5,000 g再离心1分钟以确保所有液体穿过膜。 4. 加入3.5 ml XWP缓冲液并以5,000 g离心5分钟去除离心柱中的残余体积。弃去收集管中的所有流穿液。 提示:可能的话,降低操作步骤中5000 g的离心力至3000 g以减少损失。 5. 将离心柱移至一个新的收集管中。 6. 加700 µl QIAzol到膜上。以5,000 g离心5分钟,收集溶解样并完全转移至一个2 ml管中。 继续Part II从步骤7开始。
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