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β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书.pdf

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β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书.pdf
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细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒 产品编号 产品名称 包装 C0602 细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒 100次 产品简介:  细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒 (Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一种 基于 衰老时 SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对 衰老 细胞或组织 进行染色检测的试剂盒。 在普通的光学显微镜下就可以 观 测到 细胞或组织的衰老情况 。本试剂盒可以用于培养细胞的 衰老 检测,也可以用于 组织切片的 衰老检测。  绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力,在不能分裂后就进入衰老 (senescence)状 态。此时细胞仍然是存活的,但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大 改变。衰老 (senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱 导细胞分裂,并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊,不同于一些损伤 诱导的细胞休眠,也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞细胞通常体积变大,表达 pH 6.0时有高酶活性的 β-半乳糖苷酶 。 细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式,同时也是生物体老化 (aging)的一种潜在原因。  碧云天生产的 细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色试剂盒 , 以 X-Gal为底物,在 衰老特异性的 β-半乳糖苷酶 催化下 会 生成深蓝色 产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达 β-半乳糖苷酶的细胞或组织。  本试剂盒仅染色衰老细胞,不会染色衰老前的细胞 (presenescent cells)、 静止期细胞 (quiescent cells)、 永生细胞 (immortal cells)或肿瘤细胞。  如果使用 6孔板检测,足够测定 100个样品;使用 24孔板测定,足够测定 400个样品;使用 96孔板测定 , 足够测定 1000个样品。对于组织切片或组织块,可以检测的样品 数量视样品的大小而定。对于普通的切片也至少足够检测 100个样品。 包装清单: 产品编号 产品名称 包装 C0602-1 β-半乳糖苷酶染色固定液 100ml C0602-2 X-Gal溶液 5ml C0602-3 β-半乳糖苷酶染色液 A 1ml C0602-4 β-半乳糖苷酶染色液 B 1ml C0602-5 β-半乳糖苷酶染色液 C 100ml - 说明书 1份 保存条件: -20℃ 保存,一年有效。 其中 X-Gal溶液 需避光保存。 注意事项:  β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性,操作时请注意防护。  细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色 反应依赖于特定的 pH条件,不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。用于细胞培养的二氧化碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的 pH值,而导致染色失败。  β-半乳糖苷酶染色液 B在刚刚溶解后会观察到有沉淀,属正常现象,充分混匀或 Vortex后,沉淀会全部溶解。作为常规,试剂使用前必须确保沉淀全部溶解,并且混匀。  配制染色工作液时需使用 聚丙烯 (polypropylene)容器 或玻璃容器,不宜使用 聚苯乙烯 (polystyrene)容器 。但染色时可以在聚苯乙烯 (polystyrene)容器 中进行,例如普通的 6孔板就可以用作染色的容器。  需自备 PBS或 HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用 说明: 1. 对于 贴壁细胞 : a. 对于 6孔板 中培养的细胞 ,吸 除 细胞培养液, 用 PBS或 HBSS洗涤 1次, 加入 1毫升 β-半乳糖苷酶染色固定液,室温固定15分钟。对于其它类型的培养板,固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。 b. 吸 除 细胞固定液,用 PBS或 HBSS洗涤细胞 3次, 每次 3分钟。 c. 吸 除 PBS或 HBSS,每孔加入 1毫升染色 工作 液。使用聚丙烯 (polypropylene)容器,不能使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器配制染色 工作 液。染色 工作 液的配制 方法 参考表 1。 表 1. 染色 工作 液的配制 方法 。 β-半乳糖苷酶染色液 A 10 μl β-半乳糖苷酶染色液 B 10 μl β-半乳糖苷酶染色液 C 930 μl X-Gal溶液 50 μl 说明:对于 聚丙烯 容器和 聚苯乙烯 容器的简单的判定方法是: 聚丙烯 容器可以高温高压灭菌;而 聚苯乙烯 容器不适合高温高压灭菌,一旦高温高 压处理就会严重变形。 d. 37℃ 孵育 过夜 ,可以用 parafilm或保鲜膜封住 6孔板防止蒸发。 注意: 37℃ 孵育
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